自噬基因LC-3與子宮內(nèi)膜異位癥的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景:
　　子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis,EMs)是一種常見(jiàn)和多發(fā)的婦科內(nèi)分泌疾病,其引起的不孕及慢性疼痛癥狀嚴(yán)重影響育齡婦女生殖健康和生活質(zhì)量。目前 EMs的發(fā)病機(jī)制不明。
　　程序性細(xì)胞死亡(Programmed ce1l death,PCD)由多種信號(hào)通路控制并維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定性。PCD分為兩種:細(xì)胞凋亡(屬I(mǎi)型細(xì)胞死亡,由caspase介導(dǎo))和自體吞噬(屬I(mǎi)I型細(xì)胞死亡,非caspase介導(dǎo))。

2、自噬與溶酶體相融合形成自噬溶酶體將吞噬物降解消化,吞噬物包括蛋白質(zhì)及細(xì)胞器等。自噬在多種疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著作用。
　　微管相關(guān)輕鏈蛋白-3(Microtubule associated protein light chain3,LC-3)是酵母細(xì)胞自噬相關(guān)基因ATG8的同源基因。LC-3在多種腫瘤疾病中的表達(dá)水平出現(xiàn)異常,而子宮內(nèi)膜異位癥與腫瘤又有相似的生物學(xué)行為,目前細(xì)胞自噬與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病機(jī)制關(guān)系的研究報(bào)道較少,本實(shí)驗(yàn)

3、對(duì)細(xì)胞自噬泡超微結(jié)構(gòu)及自噬基因LC-3與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病機(jī)制進(jìn)行相關(guān)性研究。
　　目的:
　　探討子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜細(xì)胞自噬泡超微結(jié)構(gòu)變化;LC-3 mRNA和蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜細(xì)胞中的表達(dá)及意義。
　　方法:
　　本文收集31例內(nèi)異癥患者的異位內(nèi)膜組織及該患者相應(yīng)的在位內(nèi)膜組織為實(shí)驗(yàn)組,31例正常的子宮內(nèi)膜組織為對(duì)照組,應(yīng)用透射電鏡觀察內(nèi)異癥在位及異位內(nèi)膜中細(xì)胞自噬泡超微

4、結(jié)構(gòu)的改變;RT-PCR、Western-blotting方法檢測(cè) LC-3 mRNA和蛋白在內(nèi)異癥組在位內(nèi)膜細(xì)胞、異位內(nèi)膜細(xì)胞及正常子宮內(nèi)膜細(xì)胞中的表達(dá),利用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
　　結(jié)果
　　實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組患者的平均年齡分別為:(32.48±4.36)歲;(32.39±2.64)歲,兩組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);透射電鏡結(jié)果分析顯示:實(shí)驗(yàn)組的在位內(nèi)膜細(xì)胞及異位內(nèi)膜細(xì)胞中的自噬泡數(shù)目較對(duì)照組的

5、正常子宮內(nèi)膜細(xì)胞的自噬泡數(shù)目有所下調(diào);Real time-PCR結(jié)果分析顯示:LC-3 mRNA在實(shí)驗(yàn)組的在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞及異位內(nèi)膜細(xì)胞中表達(dá)均低于對(duì)照組內(nèi)膜細(xì)胞(P=0.015),實(shí)驗(yàn)組在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的LC-3 mRNA較對(duì)照組內(nèi)膜細(xì)胞是下調(diào)的(0.435±0.227;P=0.013),實(shí)驗(yàn)組異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的LC-3 mRNA表達(dá)量比對(duì)照組降低(0.429±0.303;P=0.011),但實(shí)驗(yàn)組在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜細(xì)胞的LC-3 m

6、RNA表達(dá)量無(wú)明顯差異(1.282±0.534;P=0.949);Western Blot結(jié)果分析顯示:LC-3蛋白在實(shí)驗(yàn)組的在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞及異位內(nèi)膜細(xì)胞中表達(dá)均低于對(duì)照組內(nèi)膜(P=0.000),實(shí)驗(yàn)組在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的LC-3蛋白較對(duì)照組內(nèi)膜細(xì)胞是下調(diào)的(0.242±0.08,0.440±0.08;P=0.000),實(shí)驗(yàn)組異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的LC-3蛋白表達(dá)量比對(duì)照組降低(0.309±0.09;P=0.000),但同時(shí)實(shí)驗(yàn)組異位內(nèi)膜細(xì)