不同溫度控制條件下兔VX2肝腫瘤射頻消融后不同區(qū)域細(xì)胞凋亡和增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景及目的:目前射頻消融已成為肝臟原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肝癌有效治療方法之一。射頻消融治療主要是利用高頻交流電流(350-500KHz)使細(xì)胞組織內(nèi)離子產(chǎn)生震蕩摩擦生熱,導(dǎo)致細(xì)胞損傷壞死。當(dāng)溫度超過60℃會(huì)使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和脂質(zhì)雙分子層變性,從而導(dǎo)致細(xì)胞不可逆性死亡。當(dāng)在較低溫度下(50℃～55℃),射頻治療4～6 d可造成細(xì)胞不可逆的損傷。因此有必要對(duì)不同溫度控制條件下肝癌射頻消融后殘瘤細(xì)胞活性變化規(guī)律進(jìn)一步研究。
　　本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)不

2、同溫度控制條件下射頻消融兔肝VX2腫瘤后靶區(qū)內(nèi)腫瘤細(xì)胞凋亡、增殖變化情況,探討不同溫控條件下射頻消融對(duì)惡性腫瘤組織細(xì)胞活性的影響情況,為肝惡性腫瘤射頻消融治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　材料與方法:對(duì)健康新西蘭大白兔行開腹肝左葉種植VX2瘤株,建立兔VX2肝腫瘤模型。對(duì)照組6只,實(shí)驗(yàn)組72只,在兔接種VX2瘤株14 d后行肝臟CT平掃及雙期增強(qiáng)掃描,以確定VX2瘤株接種是否成功。3 w后腫瘤直徑約2.0～2.5 cm,將對(duì)照組6只處死,取

3、肝內(nèi)腫瘤組織行病理檢查。實(shí)驗(yàn)組中分為三組(n=24)。每組皆在開腹下行射頻消融術(shù)。第一組條件:射頻針溫度50℃～70℃,射頻電壓48 v,治療時(shí)間15 min。第二組條件:射頻針溫度70℃～90℃,射頻電壓48 v,治療時(shí)間15 min。第三組條件:射頻針溫度90℃～110℃,射頻電壓48 v,治療時(shí)間15 min。術(shù)后即刻、1 d、3 d、1 w、2 w、3 w,共6個(gè)時(shí)間段處死(n=6)。將殘瘤大體標(biāo)本分為:針道炭化區(qū)、熱凝固區(qū)、充

4、血出血區(qū)(消融邊界區(qū)),三區(qū)標(biāo)本分別置入10％福爾馬林浸泡,然后脫水、烘干、石蠟包埋,行HE染色、tunel、PCNA免疫組化檢測。術(shù)中觀察腹腔內(nèi)、肺轉(zhuǎn)移情況。分析瘤體經(jīng)過不同溫度RFA治療后,不同區(qū)帶內(nèi)腫瘤細(xì)胞活性變化特點(diǎn)。
　　結(jié)果:
　　1.本組實(shí)驗(yàn)中78只新西蘭兔,肝內(nèi)接種成功77只(成瘤率98.7%),腫瘤病灶直徑約2.0～2.5 cm;2只分別在種植后第7、10 d死亡,發(fā)現(xiàn)腹腔轉(zhuǎn)移灶2只。接種未成功的和死亡的予

5、以補(bǔ)種。
　　2.HE染色:針道碳化區(qū):三組標(biāo)本(50℃～110℃)光鏡下見大量腫瘤細(xì)胞結(jié)構(gòu)消失,胞核固縮、核碎裂、部分腫瘤細(xì)胞溶解液化。熱凝固區(qū):(1)50℃～70℃組:1 w后見較多存活的腫瘤細(xì)胞和炎性細(xì)胞;3 w后見到大量存活的腫瘤細(xì)胞。(2)第二、三組(70℃～110℃):1～3 d后見到大量凝固壞死細(xì)胞和少量壞死細(xì)胞;1 w后,熱凝固區(qū)逐漸變成白色并與周圍區(qū)域分界欠清,炎性細(xì)胞浸潤明顯;3 w后可見部分存活腫瘤細(xì)胞。充血

6、出血區(qū):(1)50℃～70℃組:2 w后見交界區(qū)內(nèi)較多的腫瘤細(xì)胞,其形態(tài)及分布較規(guī)則,細(xì)胞輕度水腫,肝竇間隙見大量紅細(xì)胞;3 w后可見大量腫瘤細(xì)胞。(2)第二、三組(70℃～110℃):2 w后見少許腫瘤細(xì)胞存在并見少量纖維增生;3 w后可見較多腫瘤細(xì)胞。
　　3.RFA術(shù)后兔VX2肝腫瘤凋亡的TUNEL法檢測結(jié)果:(1)50℃～70℃組凋亡指數(shù)(AI):針道區(qū)為0.22±0.19,熱消融區(qū)為0.38±0.17,交界區(qū)為0.39±

7、0.11;(2)70℃～90℃組AI:針道區(qū)為0.28±0.09,熱消融區(qū)為0.54±0.07,交界區(qū)為0.59±0.10;(3)90℃～110℃組AI:針道區(qū)為0.30±0.07,熱消融區(qū)為0.60±0.17,交界區(qū)為0.61±0.12;與對(duì)照組(AI:0.05±0.07)比較有明顯意義(P<0.05)。三組針道區(qū)6個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比較無明顯差異(P>0.05)。第二、三組熱消融凝固區(qū)和充血出血區(qū)(交界區(qū))凋亡指數(shù)相比較(P>0.05)無明

8、顯差異,第一組和二、三組熱消融凝固區(qū)和充血出血區(qū)(交界區(qū))凋亡指數(shù)相比較在術(shù)后即刻、1 d、3 d相比較(P<0.05)有差異,在1 w和3 w相比較(P>0.05)無明顯差異。和對(duì)照組比較(P﹤0.05)有統(tǒng)計(jì)學(xué)愿意。
　　4.RFA術(shù)后兔VX2肝腫瘤增殖的PCNA檢測結(jié)果:第一組(針道區(qū)、熱消融區(qū)、充血出血區(qū))各區(qū)域在不同時(shí)間點(diǎn)增值指數(shù)(PI)與對(duì)照組(PI:0.20±0.29)比較(P<0.05)有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其針道炭化

9、區(qū)在即刻、1 d后PI無較大變化;熱凝固區(qū)在2 w后PI指數(shù)恢復(fù)到術(shù)前對(duì)照水平;充血出血區(qū)在2 w時(shí)PI明顯升高,PI與術(shù)前對(duì)照組相比(P>0.05)無明顯差別。第二、三組三區(qū)帶(針道區(qū)、熱消融凝固區(qū)、充血出血區(qū))內(nèi)各區(qū)域在不同時(shí)間點(diǎn)增值指數(shù)(PI)與術(shù)前對(duì)照組比較(P<0.05)有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中針道炭化區(qū)在即刻、1 d后PI數(shù)值無較大變化;熱凝固區(qū)在3w后PI指數(shù)恢復(fù)到術(shù)前對(duì)照水平;交界區(qū)在1 w時(shí)PI升高,在2 w時(shí)PI明顯升

10、高(P<0.05),但仍低于對(duì)照組,在3 w后PI則高于對(duì)照組。各區(qū)域之間PI比較在2w后有明顯差別。
　　結(jié)論:
　　1.兔VX2肝腫瘤模型改良法具有復(fù)制簡單、成功率高、成瘤周期短等的特點(diǎn),可較好地應(yīng)用于肝癌射頻消融的實(shí)驗(yàn)研究。
　　2.射頻消融溫度在50℃～110℃范圍內(nèi)對(duì)兔VX2肝腫瘤針道區(qū)內(nèi)腫瘤細(xì)胞基本能達(dá)到滅活作用;
　　3.射頻消融溫度在50℃～70℃范圍內(nèi),兔VX2肝腫瘤的邊界區(qū)在2w后仍出現(xiàn)增值能