NSCs及NPCs分化過(guò)程中NMDA受體介導(dǎo)電流的變化.pdf

1、目的：體外誘導(dǎo)NSCs并使NSCs分化為NPCs，觀察NSCs及NPCs在發(fā)育過(guò)程中NMDARs(NMDA受體)介導(dǎo)的全細(xì)胞電流的變化情況，以及Na+、Ca2+電流出現(xiàn)的先后順序，為作用于NMDARs促進(jìn)NSCs分化為NPCs的藥物提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：應(yīng)用細(xì)胞免疫化學(xué)方法觀察神經(jīng)干細(xì)胞Nestin以及分化1d、3d、7d、9dNPCs的βⅢ-tubulin表達(dá)情況。應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)在-60mv鉗制電壓下記錄NS

2、Cs和NPCs電流。將NSCs和NPCs和分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組觀察NSCs的NMDARs介導(dǎo)的電流變化以及NPCs分化1d、3d、5d、7d、9d時(shí)NMDARs介導(dǎo)的電流變化。對(duì)照組加入無(wú)Mg2+的配制20μM CNQX(AMPA和KA受體阻斷劑)沖洗細(xì)胞20s后立即加入無(wú)Mg2+的細(xì)胞外液；實(shí)驗(yàn)組先加入用無(wú)Mg2+細(xì)胞外液配制20μM CNQX(AMPA和KA受體阻斷劑)沖洗細(xì)胞20s后立即加入用無(wú)Mg2+細(xì)胞外液配制的10μM、20μ

3、M、50μM、100μMNMDA，觀察NMDARs介導(dǎo)電流的變化情況。當(dāng)觀察Na+、Ca2+電流出現(xiàn)的先后順序時(shí)，(A)全電流組：先加入用無(wú)Mg2+細(xì)胞外液配制的20μMCNQX沖洗20s后立即加入用無(wú)Mg2+細(xì)胞外液配制100μMNMDA;(B)無(wú)Na+組：先用無(wú)Mg2+的NMDG（替代等摩爾量的Na+）細(xì)胞外液配制的20uMCNQX沖洗細(xì)胞20s后立即加入無(wú)Mg2+的NMDG細(xì)胞外液配制的100μMNMDA;(C)無(wú)Ca2+組，先用

4、無(wú)Mg2+的EGTA(螯合細(xì)胞外液的Ca2+)細(xì)胞外液配制的20μMCNQX沖洗細(xì)胞20s后，加入無(wú)Mg2+的EGTA細(xì)胞外液配制的100μMNMDA;(D)無(wú)Na+、Ca2+組，先用無(wú)Mg2+的無(wú)Na+、無(wú)Ca2+細(xì)胞外液配制的CNQX20μM沖洗細(xì)胞20S，后加入用無(wú)Mg2+的無(wú)Na、無(wú)Ca2+細(xì)胞外液配制的100μM NMDA,觀察電流變化。
　　 結(jié)果：1.免疫細(xì)胸化學(xué)方法觀察到NSCs的Nesting為陽(yáng)性，1d、7d

5、、9d的NPSs的βⅢ-tubulin為陽(yáng)性。
　　 2.未檢測(cè)到NSCs的NMDARs介導(dǎo)電流產(chǎn)生3.在不同分化時(shí)間的NPCs中，分化1d和2d的NPCs未檢測(cè)到電流。
　　 3.分化3d、5d、7d、9d的NPCs時(shí)對(duì)照組未檢測(cè)到電流，實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)到電流，分化相同天數(shù)的NPCs隨劑量增加電流增大，p＜0.05；加入相同、劑量的NMDA，隨著時(shí)間的進(jìn)行電流增大，p＜0.05。
　　 4.檢測(cè)分化3dNPCs的NM