結(jié)核分枝桿菌Rv1273c和Rv1272c的功能研究及microRNA在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用研究.pdf

1、第一部分結(jié)核分枝桿菌Rv1273c和Rv1272c的功能研究
　　結(jié)核分枝桿菌作為一種胞內(nèi)寄生菌，主要存在于巨噬細(xì)胞吞噬體內(nèi)，需要與宿主細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)攝取營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來(lái)維持生存。因此，參與上述過(guò)程的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在結(jié)核分枝桿菌致病過(guò)程中發(fā)揮著舉足輕重的作用。已有報(bào)道結(jié)核分枝桿菌基因組中編碼了38個(gè)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。這類蛋白質(zhì)有著廣泛的底物結(jié)合譜，參與了無(wú)機(jī)離子、糖類、氨基酸、寡肽等多種物質(zhì)的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)。其中，Rv1273c-Rv1272c被預(yù)測(cè)

2、為結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞膜上的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。有報(bào)道顯示Rv1273c在結(jié)核分枝桿菌H37Rv細(xì)胞膜中的含量是H37Ra中的7倍。Rv1272c則被鑒定為維持結(jié)核分枝桿菌在小鼠體內(nèi)的感染所必需的基因。這些都提示了ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白R(shí)v1272c-Rv1273c與結(jié)核分枝桿菌的毒力有關(guān)，而關(guān)于這兩個(gè)蛋白的功能目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本研究以Rv1273c和Rv1272c為研究對(duì)象，通過(guò)在恥垢分枝桿菌mc2155中過(guò)表達(dá)這兩個(gè)蛋白，觀察細(xì)菌對(duì)EB的

3、富集情況證實(shí)該ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白為內(nèi)向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白；通過(guò)敲除兩者的同源基因MSMEG_5008與MSMEG_5009，觀察細(xì)菌在不同體外培養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)情況證實(shí)其功能對(duì)細(xì)菌在營(yíng)養(yǎng)貧瘠環(huán)境中的生長(zhǎng)尤為重要，并可能與Zn2+和Cu2+的轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)。我們的發(fā)現(xiàn)豐富了人們對(duì)結(jié)核分枝桿菌ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白功能及其與毒力的關(guān)系方面的認(rèn)識(shí)，為結(jié)核病治療藥物和新型疫苗的開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　第二部分 MicroRNA在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用研究

4、　　如今結(jié)核病依舊是全球主要的健康威脅。針對(duì)結(jié)核病致病機(jī)制以及早期診斷的研究對(duì)于降低結(jié)核病的發(fā)病率、流行性和致死率具有至關(guān)重要的意義。然而，現(xiàn)有的診斷技術(shù)無(wú)一能滿足人們對(duì)于早期、快速、精確地檢測(cè)、診斷結(jié)核分枝桿菌感染的需求。MicroRNA是一類短小的非編碼單鏈RNA，在體內(nèi)多種生理過(guò)程以及疾病進(jìn)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。隨著microRNA微陣列芯片技術(shù)的誕生，這一技術(shù)被廣泛地應(yīng)用于闡明體內(nèi)各種生理、病理機(jī)制或用以區(qū)分不同疾病狀態(tài)。更

5、重要的是，近期的研究進(jìn)一步豐富了人們對(duì)利用microRNA作為結(jié)核病分子標(biāo)志的認(rèn)識(shí)。盡管微陣列芯片技術(shù)在功能基因組學(xué)研究領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，但是樣本量的限制以及不合理的數(shù)據(jù)分析使得芯片結(jié)果的可重復(fù)性受到了影響。因此，能將多項(xiàng)研究結(jié)果進(jìn)行整合分析的薈萃分析成為了增加芯片結(jié)果可靠性切實(shí)可行的有效方法。本研究即利用薈萃分析的這一優(yōu)勢(shì)，通過(guò)將結(jié)核病的microRNA表達(dá)譜數(shù)據(jù)與其他感染性疾病或惡性腫瘤的數(shù)據(jù)進(jìn)行整合分析，旨在探究microRNA