參芪復(fù)方作用KKAy小鼠糖尿病大血管病變量效時(shí)關(guān)系研究及表觀遺傳學(xué)機(jī)制探索.pdf

1、目的：通過觀察具有養(yǎng)陰益氣、活血化瘀功效的參芪復(fù)方對(duì)糖尿病KKAy小鼠主動(dòng)脈病理形態(tài)、細(xì)胞凋亡、血脂、血糖、血 oxLDL、血3-NT、8-iso-PGH2α以及TNF-α、TLR-4、mTOR、MIP-2蛋白表達(dá)的影響，從表觀遺傳學(xué)角度，應(yīng)用DNA甲基化技術(shù)尋找參芪復(fù)方防治糖尿病大血管病變的分子靶點(diǎn)，探討參芪復(fù)方防治糖尿病大血管病變的作用機(jī)制，為中藥防治糖尿病大血管病變提供理論依據(jù)。
　　方法：將273只7-8周齡雄性自發(fā)性2型

2、糖尿病KKAy小鼠（由北京華阜康生物科技股份有限公司提供,質(zhì)量許可證號(hào):SCXK(京)2009一0004）隨機(jī)分成6組：空白組，模型對(duì)照組，參芪復(fù)方高劑量組，參芪復(fù)方中劑量組，參芪復(fù)方低劑量組，二甲雙胍組。其中空白組給予普通飼料，模型組、參芪復(fù)方高劑量組、參芪復(fù)方中劑量組、參芪復(fù)方低劑量組、二甲雙胍組KKAy小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，每日給予高脂飼料，連續(xù)8周，造成糖尿病大血管病變模型，造模完成后，模型組給予10ml/kg.d生理鹽水灌服，

3、參芪復(fù)方高劑量組給予28.8g/kg.d參芪復(fù)方浸膏灌服，參芪復(fù)方中劑量組給予14.4 g/kg.d參芪復(fù)方浸膏灌服，參芪復(fù)方低劑量組給予7.2 g/kg.d參芪復(fù)方浸膏灌服，二甲雙胍組給予0.167g/kg.d灌服。實(shí)驗(yàn)期間觀察KKAy小鼠的一般狀況、飲水量、攝食量、體重變化，監(jiān)測(cè)空腹血糖變化；分別在藥物干預(yù)的0周、3周、6周、9周4個(gè)時(shí)間段,每組隨機(jī)抽取8-10只KKAy小鼠，檢測(cè)血脂、oxLDL、3-NT、8-iso-PGH2α等

4、指標(biāo)，從組織水平檢測(cè)主動(dòng)脈血管細(xì)胞凋亡情況，HE染色對(duì)主動(dòng)脈進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，運(yùn)用免疫組化檢測(cè)主動(dòng)脈組織腫瘤壞死因子（TNF-α）、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP2）水平，借助DNA甲基化技術(shù)獲得被甲基化修飾的差異基因，在NCBI數(shù)據(jù)庫中查詢基因的相關(guān)文獻(xiàn)，運(yùn)用GO富集和pathway分析，解釋其生物學(xué)意義。
　　結(jié)果：參芪復(fù)方中劑量組的作用優(yōu)于中高組和中低組，能夠明顯緩減 KKAy小鼠多飲、多食癥狀，降低體

5、重、TC、oxLDL、3-NT、8-iso-PGH2α水平，減少血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，降低TNF-α、TLR-4、mTOR、MIP-2蛋白表達(dá)。參芪復(fù)方中劑量組與模型組和灌胃6周與3周甲基化差異基因比對(duì)，我們共發(fā)現(xiàn)具有代表性高甲基化基因：mTOR、Tnfrsf1b、Ppargc1α、Tlr5、Alox12、CYP24A1、TCF4、HB-EGF、Tnfaip8，涉及細(xì)胞過程、代謝過程、細(xì)胞殺傷、免疫反應(yīng)等方面。
　　結(jié)論：參芪復(fù)方中劑

6、量組能夠更好的改善 KKAy小鼠的一般狀態(tài)，減少其飲水、飲食量，降低體重，減少脂質(zhì)沉積，進(jìn)而減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞炎性反應(yīng)所帶來的損傷，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，減輕氧化應(yīng)激的反應(yīng)，改善主動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)狀態(tài)，降低TNF-α、TLR-4、mTOR、MIP-2蛋白表達(dá)的作用，參芪復(fù)方中劑量組保護(hù)糖尿病大血管病變的分子機(jī)制可能與DNA甲基化修飾相關(guān)，高甲基化基因涉及細(xì)胞過程、代謝過程、細(xì)胞殺傷、免疫反應(yīng)等方面，包括減輕氧化應(yīng)激，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，抑制血管平