SCL、KDR和Sema3基因在白血病和再障骨髓基質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá).pdf

1、　　目的：了解白血病干細(xì)胞(stem cell leukemia,SCL)基因、激酶插入?yún)^(qū)域受體(kinase insert domain receptor,KDR)基因和Semaphorin3(Sema3)基因在白血病、再生障礙性貧血(AA)和正常骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSC)及骨髓細(xì)胞中的表達(dá)情況,為研究其在造血微環(huán)境中的調(diào)控作用提供相關(guān)資料。 方法：收集9例AA,7例急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL),18例急性髓系白血病(AML),3

2、例慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL),17例慢性粒細(xì)胞白血病(CML)和33例正常骨髓標(biāo)本。用簡化的Dexter方法培養(yǎng)擴(kuò)增BMSC,并予免疫組化鑒定。分別收集懸浮細(xì)胞及貼壁細(xì)胞。提取RNA,用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)酶聯(lián)免疫吸附分析(RT-PCR-ELISA)試劑盒定量檢測目的基因SCL、KDR和Sema3以及管家基因β2微球蛋白(β2M)在BMSC和懸浮細(xì)胞中的表達(dá)。分析基因的表達(dá)率,并以β2M基因?yàn)閮?nèi)參照半定量分析其表達(dá)水平。 結(jié)果：S

3、CL基因在各組BMSC中的表達(dá)率以正常對(duì)照組為最高(69.7%),在AA(22.2%)、AML(27.8%)和CML(11.8%)的BMSC中的表達(dá)率均低于正常(P<0.05)。SCL基因在各組懸浮細(xì)胞中的表達(dá)率為66.7%~87.5%,各疾病組與正常對(duì)照比較均無差別。而AA和CML的懸浮細(xì)胞SCL基因的表達(dá)率(87.5%,64.3%)分別高于其對(duì)應(yīng)的BMSC(P<0.05)。PCR-ELISA半定量分析結(jié)果顯示：各疾病組的BMSC和懸

4、浮細(xì)胞中SCL基因表達(dá)水平與正常對(duì)照比較均無顯著差異；AML和正常對(duì)照組的懸浮細(xì)胞中SCL基因表達(dá)水平顯著高于其對(duì)應(yīng)的BMSC(P<0.05)。 KDR基因在各組BMSC的表達(dá)率為85.7%~97.0%,在各組懸浮細(xì)胞為57.1%~75.0%。各疾病組的BMSC以及懸浮細(xì)胞中的KDR基因的表達(dá)率與正常對(duì)照比較無顯著差異。半定量分析顯示：ALL的BMSC中KDR的表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照BMSC(P=0.006)；AML的懸浮細(xì)胞中

5、KDR的表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照(P=0.031)。 Sema3基因在各組BMSC中的表達(dá)率最高者為CML(88.2%),最低者為AA(55.6%)。AML(78.6%)和CML(71.4%)的懸浮細(xì)胞中Sema3基因表達(dá)率明顯低于正常對(duì)照(100%)(P<0.05)。各疾病組BMSC中Sema3基因表達(dá)率與正常對(duì)照比較均無顯著差異,與各組對(duì)應(yīng)的懸浮細(xì)胞比較也無差別。半定量分析結(jié)果顯示：Sema3基因在AML和CML的懸浮細(xì)胞中的