Toll樣受體4沉默聯(lián)合5-FU對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖、侵襲及凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　研究TLR4沉默聯(lián)合5-FU對(duì)胰腺癌細(xì)胞SW1990增殖侵襲及凋亡的影響，從而對(duì)胰腺癌的臨床治療提供參考。
　　方法：
　　1.選取胰腺癌細(xì)胞SW1990常規(guī)培養(yǎng),并對(duì)其進(jìn)行帶有熒光TLR4shRNA（GFP-TLR4shRNA）病毒轉(zhuǎn)染48h后，RT-PCR、Western blot檢測(cè)TLR4沉默效率。
　　2.將TLR4沉默或不沉默的SW1990細(xì)胞加或不加5-FU四組A：TLR4（+）/5-F

2、U（-），B：TLR4（-）/5-FU（-），C：TLR4（+）/5-FU（+），D：TLR4（-）/5-FU（+）：GFP-TLR4shRNA及GFP-NC組，7天后，MTT法繪制細(xì)胞增殖曲線。
　　3.將TLR4沉默（或不沉默）加（或不加）5-FU（10μmol/L），分成四組：A：TLR4（+）/5-FU（-），B：TLR4（-）/5-FU（-），C：TLR4（+）/5-FU（+），D：TLR4（-）/5-FU（+），Tra

3、nswell侵襲實(shí)驗(yàn)測(cè)定各組細(xì)胞侵襲能力，Western blot檢測(cè)TLR4、Caspase-3、Caspase-8蛋白在各組細(xì)胞的表達(dá)情況以及流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果：
　　1.SW1990細(xì)胞TLR4在沉默后其表達(dá)率明顯降低，有顯著性差異（p<0.001）。
　　2.SW1990細(xì)胞在TLR4沉默并5-FU干預(yù)后，其增殖抑制效應(yīng)比單一TLR4沉默或單用5-FU增強(qiáng)。
　　3.Transwe

4、ll侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示穿過(guò)膜細(xì)胞數(shù)量（用X±s表示）分別為：A組154±8.185、B組125.7±6.028、C組119.0±4.583、D組36.33±4.041。D組相對(duì)于B組，有顯著性差異（p<0.001）；D組相對(duì)于C組，有顯著性差異（p<0.001），B組相對(duì)于A組，有顯著性差異（p<0.01）。說(shuō)明TLR4沉默聯(lián)合5-FU相對(duì)于單一TLR4沉默或者單一加用5-FU，對(duì)SW1990細(xì)胞侵襲能力的抑制顯著增強(qiáng)。
　　4.W

5、estern blot檢測(cè)A、B、C、D四組SW1990細(xì)胞的Caspase-3、Caspase-8蛋白表達(dá)情況，D組Caspase-3、Caspase-8蛋白表達(dá)均低于其余三組。B組 Caspase-3、Caspase-8蛋白表達(dá)低于A組。
　　5.流式細(xì)胞檢測(cè)A、B、C、D四組細(xì)胞凋亡情況，與Western bolt結(jié)果相符合。其細(xì)胞凋亡量聯(lián)合用藥組明顯大于單純TLR4沉默、單用5-FU組，也大于對(duì)照組。而單純TLR4沉默組與