ERK1-2信號傳導通路介導的bFGF在人晶狀體上皮細胞增殖分化中的作用和機制.pdf

1、 目的：本實驗將培養(yǎng)人晶狀體上皮細胞進行分組,設定在相同劑量的一定時間內(nèi)用bFGF及ERK信號通路阻斷劑PD98059刺激后,檢測各組間的細胞數(shù)量、α-平滑肌肌動蛋白mRNA及磷酸化ERK的表達有無差異及各組之間的趨勢,探討PCO的形成是否在bFGF的介導下通過ERK途徑參與及相關機制。
方法：采用體外原代培養(yǎng)人晶狀體上皮細胞進行復蘇、傳代及培養(yǎng)。待培養(yǎng)細胞傳代3-5次,倒置相差顯微鏡觀察細胞生長良好,覆蓋培養(yǎng)瓶達70-

2、80%,即達到實驗要求。加入10ug/L bFGF及特異性阻斷劑PD98059作用一定時間并根據(jù)作用時間進行分組。MTT法檢測HLECs數(shù)量及活性；逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)測定HLECs中α-SMA mRNA的表達；免疫印跡實驗(Western blot)檢測ERK蛋白磷酸化水平。所有實驗數(shù)據(jù)均在SPSS19.0系統(tǒng)軟件上進行統(tǒng)計。
結果：1. HLECs的數(shù)量在僅加了bFGF組中均增多,細胞活性增強,二組間差異

3、無統(tǒng)計學意義(P>0.05),作用時間較長組,細胞數(shù)量多于作用短組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；只加bFGF組細胞數(shù)量明顯多于只加阻斷劑組及空白對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；只加入PD98059組無論在細胞數(shù)量及細胞活性,均低于其他組, 差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；在均加入bFGF及PD98059組中,可見阻斷劑作用時間長組細胞數(shù)量及活性低于作用短的組別,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
2. b

4、FGF作用劑量不變的情況下,隨著作用時間的延長,可見α-SMA mRNA表達增加明顯,二組間差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05) ；在bFGF作用時間6小時后,可見α-SMA mRNA值達最高,二組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05) ；加阻斷劑PD98059作用后,α-SMA mRNA表達減少且隨阻斷劑作用時間的延長表達減少,二組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
3.在bFGF劑量相同的情況下,隨著作用時間的延長,p-er

5、k的表達量逐漸增多,證明了bFGF的分泌促進ERK信號通路的磷酸化。在空白對照組非磷酸化的表達多于磷酸化,作用0.5h以后,磷酸化表達開始多于非磷酸化,1小時左右磷酸化表達到達一個高峰,到6小時可見磷酸化與非磷酸化的表達相差不明顯。
結論：1. bFGF對HLECs具有促增殖作用,在低濃度劑量不變的前提下,呈現(xiàn)時間相關性。2. bFGF可促進HLECs分泌α-SMA,促進HLECs分化,并呈現(xiàn)時間及劑量相關性。3.bFGF