水通道蛋白-1mRNA在人晶狀體上皮細(xì)胞中的表達.pdf

1、目的：水通道蛋白1(aquaporin1，AQP1)參與水跨膜轉(zhuǎn)運及水平衡調(diào)節(jié)，廣泛分布在機體與液體吸收和分泌有關(guān)的上皮細(xì)胞中，及可能協(xié)同水跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運的內(nèi)皮細(xì)胞中。AQP1存在于前囊下晶狀體上皮細(xì)胞，它的功能或表達水平變化直接關(guān)系到晶狀體代謝的異常。本研究用半定量RT-PCR法結(jié)合計算機成像分析系統(tǒng)檢測人晶狀體前囊膜下晶狀體上皮細(xì)胞AQP1mRNA的表達，并比較透明晶狀體和老年性白內(nèi)障患者晶狀體上皮細(xì)胞AQP1mRNA表達的差異，以及人

2、晶狀體上皮細(xì)胞系HLE-B3和老年性白內(nèi)障患者晶狀體上皮細(xì)胞AQP1mRNA表達的差異，為進一步研究老年性白內(nèi)障成因、防治提供新的線索。 實驗材料與方法 一、實驗材料 1、標(biāo)本來源透明晶狀體前囊膜9例9只眼。老年性白內(nèi)障患者晶狀體前囊膜31例31只眼(其中皮質(zhì)性白內(nèi)障14例，核性白內(nèi)障17例)。晶狀體上皮細(xì)胞系為人晶狀體上皮細(xì)胞系HLE-B3。標(biāo)本保存于-70℃冰箱。 2、實驗儀器：PCR擴增儀、凝膠電泳

3、成像儀、紫外分光光度儀，微型離心機。 3、實驗試劑：動物RNAout，RT-PCR試劑盒，特異性引物由北京三博遠(yuǎn)志生物技術(shù)有限公司合成，耐熱DNA聚合酶(Taq酶，濃度為5U/μl)及Marker(DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)DL2000)。 二、實驗方法 1、樣本總RNA的提?。菏褂肦NAout，按說明書操作。 2、反轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 3、PCR反應(yīng) 4、結(jié)果觀察：反應(yīng)結(jié)束后，取PCR產(chǎn)物5μl于2％瓊脂糖

4、凝膠電泳，成像儀觀察結(jié)果并攝像，存入成像分析系統(tǒng)。 三、統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS12.0統(tǒng)計分析軟件進行方差分析，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。 實驗結(jié)果 RT-PCR擴增產(chǎn)物，可見有一與140bp相一致的擴增片段，為標(biāo)志人AQP<,1>mRNA的表達產(chǎn)物。皮質(zhì)性白內(nèi)障患者晶狀體前囊膜和透明晶狀體前囊膜AQP<,1>mRNA表達差異有顯著性(方差分析P<0.01)。核性白內(nèi)障患者晶狀體前囊膜和透明晶狀體前囊膜．AQP

5、<,1>mRNA表達差異有顯著性(方差分析P<0.01)。皮質(zhì)性白內(nèi)障患者晶狀體前囊膜和核性白內(nèi)障患者晶狀體前囊膜AQP<,1>mRNA表達差異無顯著性(方差分析P>0.05)。皮質(zhì)性白內(nèi)障患者晶狀體前囊膜和HLE-B3細(xì)胞系A(chǔ)QP<,1>mRNA表達差異有顯著性(方差分析P<0.01)。核性白內(nèi)障患者晶狀體前囊膜和HLE-B3細(xì)胞系A(chǔ)QP<,1>mRNA表達差異有顯著性(方差分析P<0.01)。 結(jié)論 AQP<,1>m