阿爾茨海默病相關(guān)基因白細(xì)胞介素18(IL18)啟動子區(qū)多態(tài)性對其轉(zhuǎn)錄活性的影響.pdf

1、【研究背景】阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一種主要在老年期發(fā)生的以進(jìn)行性癡呆為主要特征的神經(jīng)元退行性疾病。AD的病因尚未明確，眾多研究表明其與腦內(nèi)慢性炎癥反應(yīng)相關(guān)。IL18作為一種炎癥細(xì)胞因子，近年越來越多被證實與AD發(fā)病相關(guān)。IL18基因調(diào)控區(qū)存在-607C/A（RS1946518）、-137G/C（RS187238）等 SNPs，已有文獻(xiàn)報道多態(tài)性與老年性癡呆發(fā)病間的關(guān)系，但未見這兩處基因多態(tài)性對IL

2、18基因轉(zhuǎn)錄活性影響的報道。
　　【研究目的】本課題通過分子生物學(xué)技術(shù)，建立IL18-607C/A、IL18-137G/C野生型和突變等位基因的PGL4.10重組試驗質(zhì)粒，在細(xì)胞水平研究-607C/A突變、-137G/C突變對IL18基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響。
　　【方法】選取雙熒光報告基因系統(tǒng)(pGL4.10（luc2) Basic及 pRL-TK)作為報告基因載體，用基因重組和定點突變技術(shù)構(gòu)建含不同SNP型的IL18啟動子報告

3、基因質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染人胚胎腎細(xì)胞系293細(xì)胞（HEK293)，計算不同SNP各啟動子的相對熒光素酶活性（relative luciferase activity，RLA)
　　【結(jié)果】所構(gòu)建的各 SNP型質(zhì)粒均具有明確的啟動子活性；突變質(zhì)粒-607A/-137C、-607C/-137G及-607C/-137C與野生質(zhì)粒-607A/-137G相比，轉(zhuǎn)錄活性均有顯著性差異，（P<0.01）；而單位點突變質(zhì)粒-607A/-137C、-607C