糖尿病小鼠心肌VR1、SP的改變.pdf

1、眾所周知,糖尿病是一種全球性疾病,它的發(fā)病率在以驚人的速度增加,現(xiàn)已明確,糖尿病是冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的一個危險因素.糖尿病患者心肌梗死發(fā)病率高可能與其引起的彌漫性冠狀動脈粥樣斑塊病變有關(guān),但具體機(jī)理尚不完全清楚.糖尿病的重要病理改變之一是周圍神經(jīng)病變,心血管系統(tǒng)包括心臟以及許多血管的外膜有大量感覺神經(jīng)末梢分布,糖尿病患者出現(xiàn)心肌梗死時多數(shù)為無痛性心肌梗死(PMI),其原因認(rèn)為是糖尿病可發(fā)生自主神經(jīng)疾患,侵犯交感神經(jīng)和副交感神經(jīng),引

2、起傳人神經(jīng)病變,心臟痛覺減低,導(dǎo)致其發(fā)生心肌梗死時心前區(qū)疼痛減低所致.VR1受體是已知的位于感覺神經(jīng)上的受體,VR1受體是能感受多種刺激的離子通道,包括辣椒素、熱、許多質(zhì)子.VR1受體興奮后,向上傳導(dǎo)至中樞神經(jīng)系統(tǒng)形成自主反射,局部則促使感覺神經(jīng)末梢釋放神經(jīng)遞質(zhì),包括降血鈣素基因相關(guān)多肽(CGRP)和P物質(zhì)(SP),引起一系列的反應(yīng),如血管擴(kuò)張、心跳減慢等等. 最新研究顯示,糖尿病大鼠在缺血再灌注損傷中心肌梗死面積明顯大于非糖尿

3、病大鼠,其機(jī)理尚不清楚.神經(jīng)末梢病變是糖尿病的一個常見并發(fā)癥,可引起皮膚感覺、胃腸道活動以及心臟傳導(dǎo)功能等異常.因此,有理由推測糖尿病患者心臟上感覺末梢VRl受體和/或神經(jīng)遞質(zhì)SP、CGRP的含量和/或活性發(fā)生改變,從而消弱了心臟在缺血時的自我保護(hù)機(jī)制,引起或加重心肌梗死. 研究目的: 1.明確糖尿病性神經(jīng)末梢病變中心臟VR1受體表達(dá)及其神經(jīng)遞質(zhì)SP的變化情況. 2.明確在糖尿病與心肌缺血的密切關(guān)系中VRl受體及

4、SP所起的作用. 實驗材料和方法: 1.建立糖尿病動物模型購置16只4周齡C57BL6雄性小鼠,隨機(jī)分配成A、B共2組.適應(yīng)2周后A組給予高脂飲食,B組給予普通飲食.1m后A組按100mg/kg體重腹腔注射鏈脲霉素進(jìn)行糖尿病造模,B組腹腔注射相應(yīng)體積無菌檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液作對照.繼續(xù)前述飲食喂養(yǎng)3w,剪尾取血快速血糖測定評價糖尿病造模結(jié)果(以血糖>16.7mmoI/I為標(biāo)準(zhǔn)). 2、Western bIot測

5、VRl濃度2.1配置Western bIot實驗所需液體 1)取A、B組小鼠部分心肌組織約50mg,加入組織裂解液后心肌組織勻漿后置-80℃深低溫冰箱中備用. 2)蛋白濃度測定:用Bradford比色法測定,測出吸光值后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)蛋白曲線測定樣品蛋白濃度. 3)用10﹪分離膠和基層膠進(jìn)行蛋白質(zhì)的聚丙烯酰胺凝膠電泳. 4) Western blot測定VR1濃度. 3.放免法測定SP3.1配置1N冰醋

6、酸和1N NaOH 1) A、B組心肌組織,測定重量后進(jìn)行心肌組織勻漿貯存于-20℃待測. 2) ECT室放免法測定S.P. 3)計算結(jié)果. 4.統(tǒng)計方法 統(tǒng)計學(xué)處理:數(shù)據(jù)用平均值X±標(biāo)準(zhǔn)差S表示,采用多組方差分析SPSS 10.0for windOWS One-Way ANOVA統(tǒng)計. 結(jié)果: 1.對照組血糖位于正常范圍,無小鼠發(fā)生糖尿病.給予高脂飲食及鏈脲霉素腹<腔注射后的小鼠

7、血糖均>16.7mmol/l,較對照組明顯升高,達(dá)到糖尿病標(biāo)準(zhǔn),糖尿病造模成功. 2. 給予高脂飲食及鏈脲霉素造模成功的糖尿病小鼠組心肌VR1低于正常對照組,有顯著性差異. 3. 糖尿病小鼠組心肌S.P表達(dá)量低于正常對照組,也有顯著性差異. 結(jié)論: 1.糖尿病使小鼠心臟周圍神經(jīng)發(fā)生明顯病變,神經(jīng)術(shù)梢VR1受體分布明顯減低,與糖尿病易好發(fā)心血管并發(fā)癥有關(guān),VR1與心肌缺血保護(hù)作用有關(guān). 2.糖尿病小