牛精原干細(xì)胞制備和體外培養(yǎng)的研究.pdf

1、實驗采用三種方法對新生牛睪丸精原細(xì)胞進(jìn)行了體外培養(yǎng)，對其形態(tài)學(xué)及組織學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察，即①取10-20mg的睪丸組織塊，在10％血清培養(yǎng)液中體外培養(yǎng)1周和2周，并以鮮睪丸組織為對照組，用光學(xué)組織學(xué)和電鏡組織學(xué)方法觀察和比較睪丸組織及細(xì)胞結(jié)構(gòu)；②將剪碎的睪丸組織反復(fù)吹打，使曲細(xì)精管斷裂成小段，然后用10％血清培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，用以觀察該方法中體細(xì)胞和精原細(xì)胞的生長行為，把經(jīng)培養(yǎng)后鋪層的細(xì)胞固定制片，用電子顯微鏡觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化；③用2.5％血

2、清的培養(yǎng)液對精原細(xì)胞懸液進(jìn)行長期培養(yǎng)，用來與曲細(xì)精管段法進(jìn)行對比，同時研究長期培養(yǎng)對精原細(xì)胞的影響；實驗采用含0％、2.5％、5％和10％血清的培養(yǎng)液對精原細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，觀察血清濃度對精原細(xì)胞和支持細(xì)胞生長的影響。研究結(jié)果表明：新生牛睪丸組織塊經(jīng)體外培養(yǎng)1周，管腔直徑明顯增大，管壁細(xì)胞數(shù)增多，曲細(xì)精管管腔由實心變?yōu)榭招摹ｓw外培養(yǎng)2周，管腔直徑繼續(xù)增大，管壁細(xì)胞數(shù)無明顯變化。睪丸體細(xì)胞的增殖速率隨著培養(yǎng)液中血清濃度升高而增加，無血清組中體

3、細(xì)胞呈負(fù)增長。0％、2.5％、5％和10％四組中，2.5％血清有利于精原細(xì)胞生長并形成較多的集落，同時有利于維持精原細(xì)胞的未分化狀態(tài)。曲細(xì)精管段培養(yǎng)法、精原細(xì)胞懸液培養(yǎng)法和不同血清濃度培養(yǎng)法均獲得了典型的精原細(xì)胞集落，其中曲細(xì)精管段培養(yǎng)法獲得的精原細(xì)胞集落數(shù)量較多，體積較大。新生牛睪丸中存在大小不同的兩類精原細(xì)胞，經(jīng)過1周的培養(yǎng)，位于管腔中的精原細(xì)胞有些遷移至基膜上。新生牛睪丸曲細(xì)精管基膜呈多板層狀結(jié)構(gòu)，厚度1.27±0.11μm，這種