孕婦血清、胎盤組織中Shh表達(dá)變化及滋養(yǎng)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷、凋亡和子癇前期發(fā)病關(guān)系.pdf

1、本文主要從以下幾部分展開論述：
　　第一部分：孕婦血清及胎盤組織中Shh表達(dá)變化和子癇前期發(fā)病關(guān)系
　　目的：
　　探討孕婦血清及胎盤組織中音猬因子（Sonic hedgehog，Shh）的表達(dá)變化在子癇前期發(fā)病中作用。
　　方法：
　　選擇2012年10月～2013年12月于福建省婦幼保健院產(chǎn)科住院分娩的60例重度子癇前期孕婦，按發(fā)病時(shí)孕周不同分為早發(fā)型子癇前期組（發(fā)病時(shí)孕周＜34周）和晚發(fā)型子癇前期組（

2、發(fā)病時(shí)孕周≥34周）各30例；另選同期正常晚期妊娠孕婦60例，根據(jù)孕周不同分為早發(fā)型對(duì)照組（孕周＜34周）和晚發(fā)型對(duì)照組（孕周≥34周）各30例。
　　應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測孕婦血清Shh水平，應(yīng)用免疫組化定位Shh蛋白在胎盤中的表達(dá)部位、蛋白印跡法（western blotting）檢測胎盤中Shh蛋白表達(dá)水平、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（real-time PCR）技術(shù)檢測mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：<

3、br>　　1.早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期組血清Shh水平分別為（40.35±30.41）ng/mL及（36.47±18.49）ng/mL，早發(fā)型及晚發(fā)型對(duì)照組分別為（31.09±12.13）ng/mL及（32.77±23.89）ng/mL，分別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而早發(fā)型子癇前期組與晚發(fā)型子癇前期組比較、早發(fā)型對(duì)照組與晚發(fā)型對(duì)照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.正常妊娠與子癇前期胎盤中均有Shh

4、表達(dá)，Shh蛋白在胎盤組織中主要表達(dá)于合體滋養(yǎng)細(xì)胞胞漿。
　　3.在早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期胎盤中Shh蛋白相對(duì)水平為（0.58±0.09）及（0.69±0.14），晚發(fā)型對(duì)照組為（0.37±0.07）。早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期組與晚發(fā)型對(duì)照組分別比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；早發(fā)型子癇前期組與晚發(fā)型子癇前期組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　4.早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期組胎盤shh mRNA相對(duì)含量分別

5、為（1.86±.52）及（1.79±0.24），晚發(fā)型對(duì)照組為（0.90±0.09）。早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期組與晚發(fā)型對(duì)照組分別比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；早發(fā)型子癇前期組與晚發(fā)型子癇前期組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　子癇前期患者胎盤組織中Shh表達(dá)水平升高。
　　第二部分：不同濃度3-羥基棕櫚酸對(duì)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激水平的影響與子癇前期的關(guān)系
　　目的：

6、　　探討3-羥基棕櫚酸與胎盤線粒體氧化應(yīng)激損傷水平變化在子癇前期發(fā)病中的作用。
　　方法：
　　選擇2012年10月?2013年12月于福建省婦幼保健院產(chǎn)科住院剖宮產(chǎn)分娩的正常妊娠孕婦，取胎盤組織，應(yīng)用子癇前期患者血清、正常孕婦血清以及不同濃度3-羥基棕櫚酸（3-hydroxypalmitic，3-HPA）進(jìn)行體外孵育。應(yīng)用紫外比色法檢測胎盤線粒體膜脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平；WS

7、T法（Total Superoxide Dismutase Assay Kit with WST-1）檢測胎盤組織中過氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的活性水平；熒光染料法檢測胎盤線粒體膜電位變化。
　　結(jié)果：
　　1.3-HPA干預(yù)組與對(duì)照組比較，發(fā)現(xiàn)MDA水平升高，100μM3-HPA組與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；子癇前期血清組與正常孕婦血清組比較，MDA水平升高，差異

8、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.3-HPA干預(yù)組與對(duì)照組比較，發(fā)現(xiàn)SOD活性水平降低；25μM，50μM，100μM組與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；子癇前期血清組與正常孕婦血清組比較，MDA水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.3-HPA干預(yù)組中胎盤組織中MDA水平及SOD活性水平與3-HPA濃度有相關(guān)性（P＜0.05），線粒體膜MDA水平與胎盤組織SOD活性水平有相關(guān)性（P＜0.0

9、5）。
　　結(jié)論：
　　血清長鏈脂肪酸3-HPA水平升高及胎盤組織中抗氧化酶活性水平下降可能是胎盤線粒體氧化應(yīng)激損傷水平升高的原因之一。
　　第三部分：長鏈3-羥基棕櫚酸及Shh和胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷、凋亡關(guān)系的研究
　　目的：
　　探討3-HPA及Shh對(duì)人早孕滋養(yǎng)細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激損傷、凋亡水平的影響。
　　方法：
　　采用人早期妊娠絨毛細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞系HTP-8，傳代后長至70?80％時(shí)

10、，分別加入含10%正常妊娠孕婦血清（正常孕婦組）、10%子癇前期患者血清（子癇前期組）、含Shh的10%子癇前期患者血清培養(yǎng)基（Shh治療組）、含3-HPA的無血清培養(yǎng)基（3-HPA組）、單純無血清培養(yǎng)基（對(duì)照組）孵育24小時(shí)，檢測滋養(yǎng)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷、凋亡水平。
　　滋養(yǎng)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷水平測定：應(yīng)用紫外比色法檢測滋養(yǎng)細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物MDA水平；WST法檢測滋養(yǎng)細(xì)胞SOD的活性水平；流式細(xì)胞儀檢測滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡水平。

11、r>　　結(jié)果：
　　1.子癇前期組氧化應(yīng)激損傷、凋亡水平高于正常孕婦，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.3-HPA組的滋養(yǎng)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷、凋亡水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.添加Shh的子癇前期血清孵育后滋養(yǎng)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷、凋亡水平較子癇前期組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　長鏈脂肪酸可引起滋養(yǎng)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷、凋亡水平升高；子癇前期患者血