孕婦血清、臍血及胎盤組織中AGEs表達(dá)變化及滋養(yǎng)細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激損傷和子癇前期發(fā)病關(guān)系.pdf

1、第一部分：
　　目的:
　　探討孕婦血清、臍血及胎盤組織中晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)的表達(dá)變化在子癇前期發(fā)病中作用。
　　方法:
　　選擇2011年10月~2012年09月在福建省婦幼保健院住院分娩的60例重度子癇前期患者,按孕周不同分為早發(fā)型子癇前期組(發(fā)病時孕周<34W)和晚發(fā)型子癇前期組(發(fā)病時孕周≥34W)各30例;另選同期正常晚期妊娠孕婦60例,根據(jù)孕周不同分為早發(fā)型對照組(孕周<34W)和晚發(fā)型對照

2、組(孕周≥34W)各30例。
　　應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測孕婦血清及臍血AGEs水平,應(yīng)用蛋白印跡法(westernblotting)檢測孕婦胎盤組織中AGEs表達(dá)水平;應(yīng)用改良銅試劑比色法檢測孕婦血清游離脂肪酸(freefattyacid,FFA)水平。
　　結(jié)果:
　　1.早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期組血清TG、TC、LDL、ApoB均高于同期對照組,而HDL、ApoA1低于同期對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(

3、P<0.05)
　　2.早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期組血清AGEs水平分別為(1315.91±484.33)ng/L及(1189.74±442.83)ng/L,早發(fā)型及晚發(fā)型對照組分別為(606.26±111.12)ng/L及(518.04±173.24)ng/L,早發(fā)型與早發(fā)對照組、晚發(fā)型與晚發(fā)對照組比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期組臍血中AGEs水平分別為(1416.64±458.08

4、)ng/L及(1370.46±442.83)ng/L,均高于晚發(fā)型對照組(827.70±257.93)ng/L,分別比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　4.早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期組胎盤組織中AGEs表達(dá)水平分別為(2.05±0.36)及(1.74±0.31),均高于晚發(fā)型對照組(1.01±0.11),分別比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　5.早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期組血清FFA水平分別為(1.36±0

5、.41)mmol/L及(1.20±0.41)mmol/L,早發(fā)型及晚發(fā)型對照組分別為(0.68±0.20)mmol/L及(0.65±0.17)mmol/L,分別比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);但早發(fā)型與晚發(fā)型子癇前期組比較、早發(fā)型與晚發(fā)型對照組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　6.早發(fā)型與晚發(fā)型子癇前期組血清FFA水平與TG呈正相關(guān)(P<0.05,r值分別為0.778和0.610);早發(fā)型與晚發(fā)型子癇前期組

6、血清AGEs水平與TG呈正相關(guān)(P<0.05,r值分別為0.525和0.441);早發(fā)型及晚發(fā)型子癇前期組血清AGEs水平與FFA均呈正相關(guān)(r值分別為0.764和0.774,P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.子癇前期患者血脂代謝異常。
　　2.子癇前期患者血清、臍血及胎盤組織中AGEs水平升高可能是子癇前期發(fā)病的重要因素之一。
　　3.子癇前期患者血清AGEs水平與血清FFA水平呈正相關(guān),它們可能共同參與子

7、癇前期發(fā)病。
　　第二部分：
　　目的：
　　探討模擬子癇前期患者血清濃度的FFA、AGEs及CoQ10對人早孕滋養(yǎng)細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激損傷的影響。
　　方法：
　　采用酶消化法培養(yǎng)人早孕(孕6~8周)滋養(yǎng)細(xì)胞,傳代后長至70~80％時,分別加入含10%正常妊娠孕婦血清(正常孕婦組)、10%子癇前期患者血清(子癇前期組)及10%模擬子癇前期患者血清濃度的FFA(FFA組)的培養(yǎng)基孵育24小時,檢測滋養(yǎng)細(xì)胞線粒

8、體氧化應(yīng)激損傷水平。
　　細(xì)胞用含10%子癇前期患者血清的培養(yǎng)基孵育24h后,取部分細(xì)胞檢測滋養(yǎng)細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激損傷水平。隨后一組繼續(xù)用含10%子癇前期患者血清的培養(yǎng)基孵育,另一組用含AGEs600mg/L的完全培養(yǎng)基孵育,16h后兩組分別檢測線粒體氧化應(yīng)激損傷水平。
　　細(xì)胞用含10%子癇前期患者血清的培養(yǎng)基孵育24h后,檢測線粒體氧化應(yīng)激損傷水平;加含CoQ100.5ug的完全培養(yǎng)基繼續(xù)孵育24h后再次檢測線粒體氧化應(yīng)

9、激損傷水平。
　　線粒體氧化應(yīng)激損傷水平測定:應(yīng)用熒光染料法檢測線粒體膜電位,應(yīng)用熒光顯微鏡及酶標(biāo)儀檢測線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔活性,應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測線粒體DNA(mtDNA)表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.子癇前期組的線粒體氧化應(yīng)激損傷水平高于正常孕婦組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.FFA組的線粒體氧化應(yīng)激損傷水平高于正常孕婦組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.FFA組的線粒

10、體氧化應(yīng)激損傷水平與子癇前期組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　4.加AGEs組的細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激損傷水平高于同期對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　5.加AGEs組的線粒體氧化應(yīng)激損傷水平高于未加之前組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　6.CoQ10孵育后線粒體氧化應(yīng)激損傷水平較CoQ10孵育前降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.子癇前期患者血清可導(dǎo)