商陸皂苷甲急性毒性與通利二便藥效學及其作用機制研究.pdf

1、2010版《中國藥典》一部記載商陸有毒，具有逐水消腫、通利二便等功能。商陸皂苷甲(Esculentoside A，以下簡稱EsA)是從商陸中提取的一種含量最高的三萜類皂苷。本研究是國家自然基金面上項目——《基于峻瀉逐水及毒性與商陸皂苷甲變化相關的商陸炮制科學內涵的構建》（編號:81173555）任務的一部分，主要圍繞EsA的急性毒性和通利二便作用以及從水通道蛋白角度揭示EsA利尿作用機制展開一系列研究。
　　目的:初步了解EsA對

2、小鼠急性毒性的強弱及特點，并測定相關參數(shù);觀察EsA對水負荷大鼠的利尿作用，研究其對腎臟水通道蛋白2(AQP2)和水通道蛋白4(AQP4)的蛋白及mRNA表達調節(jié)作用，探討EsA利尿作用機制;通過復方地芬諾酯致便秘小鼠小腸推進試驗及排便試驗，研究EsA的瀉下作用。
　　方法:向小鼠腹腔注射不同濃度的EsA，觀察給藥后小鼠毒性反應并記錄各組小鼠死亡情況;向水負荷狀態(tài)大鼠腹腔注射不同濃度EsA，每2h收集一次尿液，連續(xù)收集6h，分別測

3、定各時段尿量并計算6h總尿量。之后將大鼠麻醉，解剖取出腎臟，運用免疫組化及實時熒光定量PCR方法檢測腎臟AQP2、AQP4蛋白及mRNA表達的變化;向復方地芬諾酯致便秘小鼠腹腔注射不同濃度EsA并灌服墨汁，每2h收集一次糞便，連續(xù)收集10h，記錄每只小鼠首粒黑便出現(xiàn)時間，糞便陰干后稱量每一時段內的排便量并計算總排便量;向復方地芬諾酯致便秘小鼠腹腔注射不同濃度EsA并灌服墨汁，給藥25min后脫椎處死，測量并計算小腸推進率;
　　結

4、果:
　　①Bliss法測得EsA的LD50為26.19 mg·kg-1，95％的可信區(qū)間為23.11 mg·kg-1～29.85 mg·kg-1;隨著EsA濃度的增加，小鼠的毒性反應表現(xiàn)越明顯，且小鼠的死亡率隨之增加，空白對照組小鼠無異常反應;由病理切片的檢查可知，EsA對小鼠肝臟、腎臟造成了不同程度的損傷。②利尿實驗中，高劑量組大鼠尿量與陰性對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，中、低劑量與陰性對照組比較無顯著性差異。高劑量

5、組EsA利尿作用主要發(fā)揮在給藥后4h內，而陽性對照藥氫氯噻嗪主要在給藥后2h內發(fā)揮藥效，說明高劑量EsA有一定的利尿作用且作用時間較氫氯噻嗪長。
　?、圻\用免疫組化及實時熒光定量PCR技術檢測發(fā)現(xiàn)，高劑量組大鼠腎臟AQP2、AQP4的蛋白及mRNA表達均較陰性對照組下調(P＜0.05)，差異具有統(tǒng)計學意義;中、低劑量組大鼠腎臟AQP2、AQP4的蛋白及mRNA表達與陰性對照組相比無顯著性差異。
　　④在排便試驗中，與模型組比

6、較，EsA高、中劑量組小鼠首粒黑便出現(xiàn)時間縮短且總排便量增加，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。小腸推進試驗中EsA高、中、低劑量組小鼠小腸推進率與模型組比較均無顯著性差異。
　　結論:EsA有一定的毒性，但對于該成分是否是商陸中的唯一或主要毒性成分，尚需深入研究;EsA在給藥量為5.2 mg·kg-1時對大鼠有明顯的利尿作用，按體表面積折算大鼠與人的等效劑量，這一劑量在臨床有效劑量范圍之內。這表明，EsA可能是商陸中起利尿作用

7、的主要成分之一;高劑量EsA能降低腎臟AQP2、AQP4的蛋白及mRNA的表達，增加尿量，提示通過降低腎臟AQP2、AQP4的蛋白及mRNA的表達量可能是其產生利尿作用的機制之一。排便試驗結果表明高、中劑量的EsA對復方地芬諾酯致便秘小鼠有一定的瀉下作用。小腸推進試驗結果表明EsA對復方地芬諾酯致便秘小鼠沒有促進小腸推進的作用。結合小腸推進試驗及排便試驗可知，EsA對復方地芬諾酯致便秘小鼠有一定的瀉下作用，但其作用機制可能不是促進小腸蠕