角膜上皮、基質(zhì)及內(nèi)皮細(xì)胞常規(guī)與模擬微重力培養(yǎng)的研究.pdf

1、　　目的：(1)研究兔角膜上皮、基質(zhì)及內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)的生物學(xué)特性，探索和改進(jìn)這3種細(xì)胞體外培養(yǎng)的方法，為組織工程角膜奠定基礎(chǔ)。(2)觀察兔角膜3種細(xì)胞接種培養(yǎng)在羊膜的生長(zhǎng)特性，為以羊膜為載體進(jìn)行分層組織工程角膜研究打下基礎(chǔ)。(3)初步探討模擬微重力對(duì)兔角膜3種細(xì)胞體外培養(yǎng)的影響。
　　方法：(1)采用組織塊法，消化法分離培養(yǎng)兔角膜上皮、基質(zhì)和內(nèi)皮細(xì)胞，觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，同時(shí)對(duì)生長(zhǎng)良好的原代細(xì)胞進(jìn)行消化傳代，進(jìn)一步觀察傳代細(xì)胞

2、的形態(tài)和生長(zhǎng)情況。(2)將兔角膜上皮、基質(zhì)和內(nèi)皮細(xì)胞種植于羊膜進(jìn)行體外培養(yǎng)，通過(guò)倒置顯微鏡、光鏡及掃描電鏡，觀察培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)、排列和細(xì)胞的粘附情況。(3)利用回轉(zhuǎn)式生物反應(yīng)器模擬微重力環(huán)境，在脫水?；|(zhì)載體上培養(yǎng)兔角膜3種細(xì)胞，使用CCK-8試劑檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，倒置顯微鏡、掃描電鏡等觀察細(xì)胞的生物學(xué)特性。
　　結(jié)果：(1)兔角膜上皮、基質(zhì)和內(nèi)皮細(xì)胞均在培養(yǎng)24h—48h內(nèi)貼壁生長(zhǎng)，在培養(yǎng)6d—9d能形成良好單層，細(xì)胞形態(tài)典型，

3、進(jìn)行多次傳代后細(xì)胞仍維持原有形態(tài)和功能，獲得的細(xì)胞能進(jìn)行長(zhǎng)期培養(yǎng)。(2)兔角膜3種細(xì)胞在羊膜生長(zhǎng)良好，可保持生理狀態(tài)的細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞與羊膜組織粘附牢固。角膜上皮細(xì)胞可形成單層和復(fù)層，細(xì)胞間連接緊密。角膜基質(zhì)細(xì)胞拉長(zhǎng)生長(zhǎng)，呈三角形和樹(shù)枝狀，細(xì)胞間連接明顯，可形成網(wǎng)狀連接。角膜內(nèi)皮細(xì)胞可形成卵圓形或多角形，細(xì)胞大小一致，排列緊密。(3)兔角膜3種細(xì)胞均能在微重力條件下獲得增殖。角膜上皮細(xì)胞呈球形，聚集成細(xì)胞團(tuán)，細(xì)胞間連接緊密。CCK-8檢測(cè)