尾巨桉組織培養(yǎng)再生體系與農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)建立的研究.pdf

1、本論文研究主要是通過對(duì)尾巨桉兩個(gè)無性系3226和3228進(jìn)行系統(tǒng)的組織培養(yǎng)試驗(yàn)，建立起良好的尾巨桉組織培養(yǎng)再生體系，并結(jié)合農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化建立遺傳轉(zhuǎn)化體系，初步獲得了Km抗性植株，基本建立了遺傳轉(zhuǎn)化體系，可為今后的尾巨桉組織培養(yǎng)與遺傳轉(zhuǎn)化研究提供重要的參考依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果表明： 1、初步確定了A+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.1～0.2mg/L為較好的繼代增殖培養(yǎng)基，它能夠使無菌苗在以較高的倍數(shù)增殖的同時(shí)能夠保持旺盛

2、的生長勢，且沒有大量的玻璃化愈傷化苗出現(xiàn)。 2、較弱的光照強(qiáng)度對(duì)尾巨桉兩個(gè)無性系在繼代增殖階段較為有利。 3、25d為繼代周期對(duì)尾巨桉無性系繼代增殖是較為有利的，它不僅可以保證較高的增殖倍數(shù)，同時(shí)也能使增殖的芽苗保持旺盛的生長狀態(tài)。 4、活性碳能夠促進(jìn)基部褐化和玻璃化愈傷化的叢芽恢復(fù)正常生長，但對(duì)這些芽苗的增殖沒有效果。 5、A+6-BA0.1mg/L+NAA0.2mg/L為較好的壯苗配方，它不僅能促進(jìn)無

3、菌苗莖段的木質(zhì)化，也增大有效葉片數(shù)量。 6、IBA對(duì)尾巨桉兩個(gè)無性系的生根有明顯的促進(jìn)作用，且濃度在1.0～1.5mg/L時(shí)最為明顯，IAA和NAA對(duì)無菌苗的生根有促進(jìn)作用但不明顯，過高的生長素濃度會(huì)抑根的生長。 7、在附加相同濃度的生長素的情況下，A半量無機(jī)鹽比A全量無機(jī)鹽更適于促進(jìn)尾巨桉兩個(gè)無性系無菌苗的生根。 8、尾巨桉兩個(gè)無性系的葉盤和莖段直接分化較為困難，分化率較低，難以達(dá)到遺傳轉(zhuǎn)化的要求。 9

4、、尾巨桉兩個(gè)無性系的葉盤和莖段均能誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織，KT愈傷組織的誘導(dǎo)及生長是有利的，較為適宜的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為A+2,4-D1.0～2.0mg/L+KT0.2～0.5mg/L。 10、無菌苗葉盤不適合作為本試驗(yàn)的遺傳轉(zhuǎn)化受體材料，雖然葉片能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織，但在愈傷組織分化不定芽時(shí)較為困難，不定芽的分化率較低。無菌苗莖段是較為適宜的遺傳轉(zhuǎn)化受體材料，莖段能通過誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織后再分化出不定芽，且能夠保持較高的分化率和生長

5、勢，較為適宜誘導(dǎo)莖段愈傷組織不定芽分化的培養(yǎng)基為A+6-BA1.0mg/L+KT0.2mg/L。 11、尾巨桉兩個(gè)無性系對(duì)Km具有較高的抗性本底，葉片和莖段的Km抗性達(dá)到了75mg/L，整體植株的Km抗性更高，為100mg/L。 12、頭孢噻肟鈉濃度為300mg/L時(shí)，可以完全抑制農(nóng)桿菌A208SE、EHA101、LBA4404的生長，且保持較高的愈傷組織誘導(dǎo)率。 13、尾巨桉兩個(gè)無性系浸染后不需要預(yù)培養(yǎng)，GUS