吡格列酮對(duì)膀胱正常移行上皮細(xì)胞及膀胱癌細(xì)胞的影響研究.pdf

1、目的:眾所周知，吡格列酮屬于TZD類(lèi)(thiazolidinediones，噻唑烷二酮類(lèi))降血糖藥物。屬于PPARγ（Peroxisome Proliferator-activated Receptor-γ，過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ）激動(dòng)劑。通過(guò)改善外周及肝臟對(duì)胰島素的敏感性來(lái)控制血糖水平。自1999年上市以來(lái)廣泛應(yīng)用于治療2型糖尿病。但近期有資料提示吡格列酮有增加膀胱癌風(fēng)險(xiǎn)的可能。吡格列酮屬于核受體超家族成員，通過(guò)與同源維甲酸受體

2、X形成異二聚體，影響基因轉(zhuǎn)錄、蛋白合成，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、細(xì)胞生長(zhǎng)及分化等。噻唑烷二酮類(lèi)藥物中，曲格列酮1997年上市，2000年因其肝衰竭風(fēng)險(xiǎn)撤市。FDA（Food and Drug Admistraton，歐洲藥品管理局）暫停了另一種TZD類(lèi)藥物羅格列酮的銷(xiāo)售，因其可增加心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。目前，吡格列酮是唯一廣泛使用中的TZD類(lèi)藥物。因此，評(píng)估吡格列酮與膀胱癌的風(fēng)險(xiǎn)是至關(guān)重要的，本研究探討吡格列酮對(duì)膀胱正常移行上皮細(xì)胞及膀胱癌細(xì)胞生長(zhǎng)的

3、影響，旨在為臨床用藥的安全性提供依據(jù)。
　　方法:原代培養(yǎng)大鼠膀胱正常移行上皮細(xì)胞。將膀胱正常移行上皮細(xì)胞及膀胱癌細(xì)胞株(J82),分別以0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L濃度吡格列酮作用0h、24h、48h、72h、8d、10d，電子顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)情況;MTT(3-(4，5-Dimethylthiazol-2-y)2，5-diphenyltetrazolium brom

4、ide，噻唑藍(lán)）法檢測(cè)吡格列酮對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用;流式細(xì)胞技術(shù)分析細(xì)胞凋亡情況;實(shí)時(shí)定量PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))法檢測(cè)腫瘤相關(guān)基因CyclinD1、P53及凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax的表達(dá);Western blot（蛋白印跡技術(shù)）檢測(cè)CyclinD1、P53、Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)。最后，依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析吡格列酮對(duì)膀胱正常移行上皮細(xì)胞及膀胱癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
　　結(jié)果

5、:吡格列酮作用于膀胱正常移行上皮細(xì)胞48h后出現(xiàn)細(xì)胞凋亡，作用強(qiáng)度呈濃度-時(shí)間依賴型。膀胱癌細(xì)胞J82則未見(jiàn)促細(xì)胞增殖或抑制現(xiàn)象。10μmol/L吡格列酮處理膀胱正常移行上皮細(xì)胞24h、72h的凋亡率（vs對(duì)照組）分別為:24h:18.8％ vs9.4％、72h:49.7％ vs11.3％。相同劑量吡格列酮處理大鼠肝臟正常細(xì)胞、腎臟正常細(xì)胞72h，均未見(jiàn)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)10μmol/L吡格列酮作用于膀胱正常移行上皮細(xì)胞

6、及J82細(xì)胞24h、48h、72h后腫瘤相關(guān)基因Cyclin D1、P53及凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax的表達(dá)均未見(jiàn)差異。Western blot法檢測(cè)10μmol/L吡格列酮作用后Cyclin D1、P53、Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)，24h、48h、72h時(shí)Cyclin D1、P53、Bcl-2、Bax均未見(jiàn)差異。長(zhǎng)期作用膀胱正常移行上皮細(xì)胞也未見(jiàn)明顯差異。但J82細(xì)胞中作用8d后CyclinD1、P53蛋白表達(dá)減弱。