兔激素型股骨頭缺血壞死發(fā)病機理、早期診斷和抗凝降脂預(yù)防激素型骨壞死發(fā)生的實驗研究.pdf

1、血液高凝狀態(tài)和血栓栓塞學(xué)說在非創(chuàng)傷性股骨頭缺血壞死發(fā)病機制中的作用逐漸得到證實和認可。但長期應(yīng)用激素引起血液高凝和血栓形成的病理生理機制尚未完全闡述清楚。本研究擬以兔為研究對象，研究應(yīng)用大劑量糖皮質(zhì)激素后引起血液高凝易栓狀態(tài)的原因和股骨頭缺血壞死的病理生理機制；并探討股骨頭缺血壞死的早期診斷方法；同時針對激素型股骨頭缺血壞死病理生理改變，采用抗凝、降血脂藥物治療，觀察是否可以阻止或降低激素型股骨頭缺血壞死的發(fā)生。 方法

2、1 選取健康成年新西蘭大白兔40只，隨機分成實驗組和對照組各20只。 分別于2周、4周、8周、12周抽取空腹耳緣靜脈全血進行PT、APTT、 AT—III以及FIB、tPA檢查和血脂水平測定。并2周、4周、8周、 12周各組取4只兔，墨汁灌注后無痛處死兔，取雙側(cè)股骨頭常規(guī)處 理HE染色、Masson染色、MSB微血栓染色組織學(xué)檢查，結(jié)果相比 較。并進行股骨頭軟骨下骨力學(xué)性能測試。 2 同樣方法建立成年新西蘭兔激素型股

3、骨頭缺血壞死模型。實驗組臀肌 注射甲強龍(20mg/kg)，對照組臀肌注射相同劑量的生理鹽水。各組分別與注射甲強龍或生理鹽水注射后2周、4周、8周分別抽取空腹 耳緣靜脈全血。分次離心獲得富含微粒血清。分別加入針對PMPs和 EMPs膜糖蛋白單克隆抗體，然后用流式細胞儀進行檢測，確定微粒 數(shù)量、來源。同時靜脈血進行PT、APTT、A1—Ⅲ以及FIB、tPA檢 查和血脂水平測定。2周、4周、8周、12周無痛處死兔4只，取雙 側(cè)股

4、骨頭常規(guī)處理HE染色、Masson染色、MSB微血栓染色后進行 組織學(xué)檢查，結(jié)果相互比較。 3 同樣方法建立成年新西蘭兔激素型股骨頭缺血壞死模型。分別于2 周、4周、8周、12周抽取空腹耳緣靜脈全血，采用放免法進行血漿 FPA測定，并于2周、4周、8周、12周分別進行影像學(xué)(包括X線、 CT檢查、股動脈穿刺股骨頭血管造影、MRI檢查)及組織學(xué)檢查， 結(jié)果相互間對比，發(fā)現(xiàn)早期診斷骨壞死的最佳方法。 4 同樣方

5、法建立成年新西蘭激素型股骨頭缺血壞死模型。然后將兔隨機 分成4組，分別口服洛伐他汀和華法林(WL組)、洛伐他汀(LA組)、 華法林(LA組)和對照組(NP組)。各組分別于2周、4周、8周、 12周抽取空腹耳緣靜脈全血進行PT、APTT、A1一Ⅲ以及血脂水平 測定。并2周、4周、8周、12周無痛處死兔4只墨汁灌注后取雙側(cè) 股骨頭常規(guī)處理HE染色、Masson染色、MSB微血栓染色后進行組 織學(xué)檢查結(jié)果相比較。觀察各組骨壞死發(fā)生

6、率。 結(jié)果 1、實驗組2周時即出現(xiàn)實驗組PT、APTT和AT—Ⅲ比對照顯著降低(P .<0.05)，F(xiàn)IB顯著增高、tPA顯著降低(P<0.05)，膽固醇、甘油三 脂水平顯著增高(p

7、肪細胞增大。按骨壞死組織學(xué)標準，骨壞死發(fā)生率67％。股骨頭軟 骨下骨力學(xué)性能顯著降低。 2、兔應(yīng)用大劑量糖皮質(zhì)激素(甲強龍)后血清PMPs和EMPs升高，表面特異抗原分析表明血小板和內(nèi)皮細胞激活，同時又內(nèi)皮細胞損害。 實驗組PT、APTT和AT—Ⅲ比對照顯著降低(P<0.05)，F(xiàn)IB顯著 增高、tPA顯著降低(P<0.05)。組織學(xué)檢查實驗組2周股骨頭骨小 梁內(nèi)空骨陷窩數(shù)量增多，呈小灶性分布；4—8周骨壞死區(qū)增大，空

8、 骨陷窩增多，骨髓出現(xiàn)典型的壞死、溶解、滲出，骨小梁表面可見破 骨細胞增多，骨吸收，骨小梁變細、中斷，骨髓內(nèi)脂肪化明顯。MSB 染色微循環(huán)內(nèi)微血栓存在。 3、實驗組2周時部分兔血清FPA水平升高并此后仍維持在較高水平，組織學(xué)分析FPA升高者幾乎都發(fā)生股骨頭缺血壞死；2-12周雙側(cè)股 骨頭X線、CT檢查無明顯異常；血管造影現(xiàn)實2周股骨頭血管數(shù)量 減少，4周后減少明顯而且管腔狹窄；MRI檢查于應(yīng)用甲強龍后兩周 即出現(xiàn)異常信

9、號改變，而且隨著時間延長信號改變越明顯，而且信號 改變與組織學(xué)改變相一致。 4、實驗組于2周時PT、APTT和AT—Ⅲ比對照組顯著增高(<0.01)，膽固醇、甘油三脂水平顯著下降(<0.01)，并且此后4.12周維持在 相對正常水平。組織學(xué)MSB染色微血栓數(shù)量顯著降低(<0.01)。各 組骨壞死發(fā)生率WL組：13.3％(2／15)：LA組，35.2％(6／17)：WA 組，41.2％(7／17)；NP組，68．8％(11

10、／16)WL組骨缺血壞死率顯著 下降(p<0.01)。 結(jié)論 1、大劑量糖皮質(zhì)激素(甲強龍)可以導(dǎo)致血液處于高凝低纖溶狀態(tài)，脂肪代謝異常引起高脂血癥、骨髓細胞脂肪變性增殖。高凝和高脂相互 作用、相互影響最終導(dǎo)致微循環(huán)血栓栓塞、脂肪栓塞，骨髓細胞脂肪變性增殖，股骨頭內(nèi)壓力增大血管受壓，股骨頭血供受阻發(fā)生缺血壞 死。股骨頭缺血壞死發(fā)生后股骨頭軟骨下骨力學(xué)性能降低，提示臨床對股骨頭缺血壞死保頭治療過程中，應(yīng)該重視對股骨頭

11、力學(xué)性能的重 建，這不僅可以阻止骨結(jié)構(gòu)的塌陷，而且可以阻止骨壞死的擴展。 2、本研究首次表明大劑量糖皮質(zhì)激素可以引起兔體內(nèi)血小板激活、內(nèi)皮細胞損害并釋放大量富含凝血因子的微粒。血小板的激活和內(nèi)皮細胞 的損害及其釋放的微?？赡苁谴髣┝刻瞧べ|(zhì)激素引起血液高凝易栓、微循環(huán)血栓形成、栓塞的根本原因。抑制微粒的生成或許有助于預(yù)防 和降低長期應(yīng)用大劑量糖皮質(zhì)激素引起的血液高凝易栓狀態(tài)，降低微循環(huán)血栓形成和栓塞的發(fā)生，從而阻止或降低股骨

12、頭缺血壞死的發(fā) 生。 3、血漿FPA水平測定可以在一定程度上反映血循環(huán)血栓形成、栓塞情況，可以預(yù)測反映骨血供狀況，可以作為對股骨頭缺血壞死高危人群 進行動態(tài)監(jiān)測的一個血清學(xué)指標，但FPA對診斷早期股骨頭缺血壞 死缺乏特異性。MRI檢查對早期發(fā)現(xiàn)診斷股骨頭缺血壞死具有重要的 價值和高靈敏度、高特異性。 4、在應(yīng)用大劑量糖皮質(zhì)激素的同時，口服抗凝藥(華法林)和降血脂藥(洛伐他汀)可以改善因應(yīng)用大劑量糖皮質(zhì)激素引起的血