維生素 K2預防激素型股骨頭壞死的實驗研究.pdf

1、目的：體外觀察激素及激素聯(lián)合應用維生素 K2對骨髓間充質(zhì)干細胞、成骨細胞及血管內(nèi)皮細胞生物學的影響，體內(nèi)觀察維生素 K2對大鼠激素型股骨頭壞死模型的預防作用.
　　方法：第一部分：提取SD大鼠BMSC，分別用5*10-5M MP及MP聯(lián)合梯度濃度的VK2（10-7M-10-5M）進行干預，檢測BMSC增值能力，細胞活性及成骨誘導3周后成骨相關(guān)蛋白Runx2、ALP、OCN的表達水平及BMSC礦化水平。第二部分：MC3T3-E1細胞

2、分別用10-5M DEX及 DEX聯(lián)合梯度濃度的VK2（10-7M-10-5M）進行干預，檢測 MC3T3-E1的增值能力，細胞凋亡，及成骨相關(guān)蛋白 Runx2、ALP、OCN的表達及礦化能力。第三部分： EAhy926、MG63分別用10-5M DEX、10-6M VK2及DEX聯(lián)合10-6M VK2進行干預，檢測EAhy926的增值能力，細胞凋亡，體外成管，遷移能力及EAhy926、MG63成管相關(guān)蛋白的表達水平。第四部分：甲強龍注

3、射建立SD大鼠激素型股骨頭壞死模型，預防性應用VK2干預，檢測各組血清OCN分泌水平、股骨頭壞死發(fā)生率、股骨頭標本Runx2、OCN蛋白表達水平及股骨頭血運情況，評價VK2對激素型股骨頭壞死的預防作用。第五部分：梯度濃度VK2(10-7M-10-5M)干預hBMSC，檢測成骨誘導1周后miR-133a及成骨相關(guān)蛋白表達水平；建立miR-133a過表達hBMSC細胞株，成骨誘導條件下梯度濃度VK2干預，檢測miR-133a及成骨蛋白表達。

4、
　　結(jié)果：第一部分：MP明顯抑制了BMSC的增值能力，細胞活性及成骨相關(guān)蛋白的表達，而VK2促進了激素干預的BMSC的細胞增值，增強了其活性，同時促進了激素干預的BMSC成骨分化能力。第二部分：DEX明顯抑制了MC3T3-E1細胞增值，促進細胞凋亡并抑制了MC3T3-E1的成骨分化，而聯(lián)合應用VK2促進了MC3T3-E1細胞增值及成骨分化能力，抑制了細胞凋亡。第三部分：DEX、VK2對EAhy926細胞增值無明顯影響，DEX抑制

5、了EAhy926細胞的成管及EAhy926、MG63成管相關(guān)蛋白的表達，VK2促進了DEX干預的EAhy926細胞的成管及EAhy926、MG63成管相關(guān)蛋白的表達。第四部分：VK2提高了激素干預大鼠血清羧化和非羧化 OCN水平，促進了OCN的羧化，降低了激素干預大鼠股骨頭壞死的發(fā)生率，同時提高股骨頭骨小梁結(jié)構(gòu)及相關(guān)蛋白的表達，保護股骨頭血供。第五部分：miR-133a過表達明顯抑制了 hBMSC成骨相關(guān)蛋白的表達，而VK2同時降低了h