功能蛋白的O-糖基化參與調(diào)控卵巢癌細胞的遷移以及E-鈣粘蛋白的表達.pdf

1、卵巢癌是婦科常見惡性腫瘤，臨床上以手術和化學藥物治療為主，由于其發(fā)病隱匿，早期缺乏特異性的臨床癥狀和體征，約70％的病例確診時已屬晚期，并且存在遠處轉(zhuǎn)移，且術后復發(fā)率高，5年存活率低。由此可見，尋找有效預防和抑制卵巢癌侵襲與轉(zhuǎn)移的分子靶點是臨床治療卵巢癌的關鍵所在。
　　O-GlcNAc糖基化是指在氧連接的β-N-乙酰葡萄糖胺基轉(zhuǎn)移酶(OGT)的催化作用下，在靶蛋白的絲/蘇氨酸殘基上添加一個N-乙酰葡萄糖胺。OGA是氧連接的β-N

2、-乙酰氨基葡萄糖苷酶，它可以催化水解糖蛋白上的0-糖鏈。已經(jīng)有研究表明，功能蛋白的O-GlcNAc糖基化在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展轉(zhuǎn)移侵襲過程中發(fā)揮著重要的作用，但是關于O-GlcNAc糖基化在卵巢癌轉(zhuǎn)移過程中的作用相關研究還未見報道。因此本課題構(gòu)建不同的卵巢癌細胞模型，以探究O-GlcNAc糖基化在卵巢癌細胞遷移過程中的作用及其分子機制。
　　在本研究中，我們首先觀察到高遷移性卵巢癌HO-8910PM細胞中OGT的mRNA以及O-Gl

3、cNAc糖基化水平均明顯高于低遷移性卵巢癌OVCAR3細胞，這提示:功能蛋白的O-GlcNAc糖基化可能參與了卵巢癌細胞遷移的調(diào)控。PUGNAc/Thiamet G處理OVCAR3細胞12h，通過qPCR和western blot方法，我們檢測到OVCAR3細胞中蛋白的O-GlcNAc糖基化水平明顯升高;通過transwell-細胞遷移實驗，我們觀察到OVCAR3細胞的遷移能力亦明顯增強。與此同時，采用干擾OGT基因的化學合成siRNA

4、轉(zhuǎn)染HO-8910PM細胞，其遷移能力明顯降低，與OGA抑制劑處理具有相同的生物學效應。我們還發(fā)現(xiàn)，PUGNAc/Thiamet G處理OVCAR3細胞12h，OVCAR3細胞中E-鈣粘蛋白的表達明顯減少，E-鈣粘蛋白/連環(huán)蛋白復合物的結(jié)合能力亦明顯減弱;而采用干擾OGT基因的化學合成siRNA轉(zhuǎn)染HO-8910PM細胞，其E-鈣粘蛋白的表達明顯增加，E-鈣粘蛋白/連環(huán)蛋白復合物的結(jié)合能力亦明顯增強;然而，β-連環(huán)蛋白和p120連環(huán)蛋白

5、的表達卻未發(fā)生明顯的改變。與此同時，我們還證實，在卵巢癌細胞中E-鈣粘蛋白、β-連環(huán)蛋白和p120連環(huán)蛋白是可以發(fā)生O-GlcNAc糖基化修飾的。綜上，研究結(jié)果提示功能蛋白的O-GlcNAc糖基化可以促進卵巢癌細胞的遷移并抑制E-鈣粘蛋白的表達，并減弱E-鈣粘蛋白/連環(huán)蛋白復合物的相互結(jié)合。因此，我們推測功能蛋白的O-GlcNAc糖基化可能是通過下調(diào)E-鈣粘蛋白的表達，降低E-鈣粘蛋白/連環(huán)蛋白復合物的結(jié)合能力，從而使細胞間的粘附能力降