Twist1對人乳腺癌細胞E-cadherin表達及成血管能力的影響.pdf

1、分類號：R 3 6 1密 級：學位類別： 科學學位a 專業(yè)學位口學校代碼：100 6 2學 號：2 0 1 0 6 0 2 0 9 5學科門類：醫(yī)學又肄眚科鼻母碩士學位論文M A S T E R ’S D I S S E R T A T I o N論文題目：T w i s t l 對人乳腺癌細胞E - c a & h e r i n 表達及成血管能力的影響T IT L E E f f e c to f T w i s t lo

2、nt h e E - c a d h e r i ne x p r e s s i o n a n dV a s c u l o g e n i cM i m i c r y o f h u m a n b r e a s t c a r c i n o m a c e l ll i n e一級學科：基礎(chǔ)醫(yī)學二級學科：病理學與病理生理學論文作者：張沖指導教師：孫保存教授導師組成員：張丹芳副教授天津醫(yī)科大學研究生院二。一三年五月天津醫(yī)科大

3、學碩士學位論文研究目的中文摘要乳腺癌是女性常見惡性腫瘤之一，雖然通過規(guī)范化治療，早期乳腺癌患者五年生存率達到9 8 ％，但是，與4 0 年前相比，轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者5 年生存率只從2 0 ％提高至2 6 ％，患者多死于轉(zhuǎn)移，故研究乳腺癌的轉(zhuǎn)移機制具有重要意義。T w i s t 是一種常染色體上的b H L H ( b a s i c h e l i x ．1 0 0 p —h e l i x ) 類型的轉(zhuǎn)錄因子，研究發(fā)現(xiàn)T w i s

4、t 在抑制腫瘤細胞凋亡，促進腫瘤細胞侵襲、轉(zhuǎn)移過程中起重要作用。本研究利用人乳腺癌細胞系M C F 一7 和M D A —M B ．2 3 1 進行細胞轉(zhuǎn)染調(diào)控其T w i s t l的表達，從而探討轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子T w i s t l 對人乳腺癌細胞上皮鈣粘蛋白( e p i t h e l i a lc a d h e r i n ，E —c a d h e r i n ) 表達的影響，及對人乳腺癌細胞遷移、侵襲和成血管塑形能力的影響

5、。方法1 ． 根據(jù)T w i s t l 表達水平，選取人乳腺癌細胞系M C F ．7 和M D A —M B 一2 3 1 ，3 7 ℃、5 ％C 0 2 恒溫培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。2 ．低表達T w i s t l 的M C F ．7 細胞轉(zhuǎn)染上調(diào)T w i s t l 表達質(zhì)粒p c D N A 3 一T w i s t l 獲得T w i s t l 上調(diào)模型，高表達T w i s t l 的M D A —M B ．2 3 1 細胞轉(zhuǎn)

6、染下調(diào)T w i s t l 表達質(zhì)粒p G P ．T w i s t l ．s h R N A 獲得T w i s t l 下調(diào)模型，利用W e s t e r n B l o t 和逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應( r e v e r s et r a n s c r i p t i o np o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ，R T - P C R ) 分別從蛋白水平和m R N A 水平

7、鑒定轉(zhuǎn)染效果；3 ．利用R T - P C R 檢測M C F 一7 細胞上調(diào)T w i s t l 和M D A —M B 一2 3 1 細胞下調(diào)T w i s t l后E —c a d h e r i n 在m R N A 水平表達的變化；4 ．利用細胞免疫熒光檢測M C F ．7 細胞上調(diào)T w i s t l 和M D A ．M B ．2 3 1 細胞下調(diào)T w i s t l 后E ．c a d h e r i n 表達及亞細

8、胞定位的變化；5 ．利用劃痕實驗觀察乳腺癌細胞M C F 一7 上調(diào)T w i s t l 和M D A —M B 一2 3 1 下調(diào)T w i s t l 后細胞遷移能力的變化；6 ．T r a n s w e l l 實驗評價乳腺癌細胞M C F 一7 上調(diào)T w i s t l 和M D A ．M B ．2 3 1 下調(diào)T w i s t l 后細胞侵襲能力的變化；7 ．進一步利用M a t r i g e l 三維培養(yǎng)模型分析T