興奮劑促紅細(xì)胞生成素的檢測及其相關(guān)試劑制備方法的研究.pdf

1、本文從促紅細(xì)胞生成素(EPO)出發(fā)，經(jīng)過動物免疫，多克隆抗體的制備以及不同的檢測抗體的制備等一系列過程，初步建立了一種靈敏檢測抗原EPO的方法，從而為簡潔、經(jīng)濟(jì)、快速的體外檢測興奮劑EPO打下一定的基礎(chǔ)。通過對ELISA方法最佳條件的選擇，確定了ELISA實(shí)驗(yàn)中的最佳底物為TMB以及酶標(biāo)抗體的適用濃度，確立了比較穩(wěn)定的用于抗原抗體檢測的不同類型的ELISA實(shí)驗(yàn)流程。從抗原EPO出發(fā)，通過免疫動物、制備抗血清以及血清的純化、效價的測定等等

2、一系列步驟，獲得了比較可行的免疫不同動物的方案。結(jié)合硫酸銨沉淀和層析的方法確立了一種多克隆抗體制備較為簡潔的實(shí)驗(yàn)流程，獲得了高濃度、高效價的純度較高的抗EPO的多克隆抗體。所制備抗體的效價是報道的多克隆抗體效價的十倍左右。通過比較HRP酶標(biāo)記抗體和生物素標(biāo)記抗體等不同的標(biāo)記抗體的方法初步認(rèn)定：HRP酶標(biāo)記抗體的制備條件比較難控制一些，不但由于酶自身的交聯(lián)很容易形成大分子，而且在后續(xù)的檢測中非特異性吸附相當(dāng)高。而生物素標(biāo)記抗體因?yàn)椴僮鞣奖?/p>