昆蟲抗菌肽對(duì)腫瘤細(xì)胞作用的效果觀察.pdf

1、腫瘤治療中的放療、化療對(duì)人體造成的傷害一直是未解決的難題，而抗菌肽的出現(xiàn)給這一領(lǐng)域帶來了一線光明。昆蟲抗菌肽能殺傷腫瘤細(xì)胞而對(duì)人體的正常細(xì)胞無毒或毒副作用甚小。本研究通過提取天然的昆蟲體內(nèi)抗菌肽，利用一些實(shí)驗(yàn)方法觀察其對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用，探討其作用機(jī)制、作用范圍和作用效果。 首先，將所選的昆蟲家蠅成蟲、幼蟲和蛹、淡色庫蚊、美洲大蠊、德國小蠊以針刺的方法感染細(xì)菌，誘導(dǎo)其產(chǎn)生抗菌肽，然后經(jīng)研磨、加熱、離心等方法提取出昆蟲血淋巴，再經(jīng)陽

2、離子交換柱層析等步驟提取這幾種昆蟲的抗菌肽；將所提的抗菌肽作用于大腸桿菌、金黃葡萄球菌、綠膿桿菌和白色念珠菌以觀察其抑菌效果；再將提取的抗菌肽作用于腫瘤細(xì)胞人髓樣白血病細(xì)胞(K562)、人淋巴瘤細(xì)胞株(daudi)、人食管癌細(xì)胞株(109)和人膀胱癌細(xì)胞株(T24)，用流式細(xì)胞儀觀測(cè)其抑制、殺傷腫瘤細(xì)胞的作用；然后用掃描電鏡觀察這些昆蟲抗菌肽作用的腫瘤細(xì)胞膜表面的受傷狀況；最后再用聚丙烯酰氨凝膠電泳方法分離提純這6組昆蟲抗菌肽，了解各組

3、昆蟲抗菌肽的種類、數(shù)量。 在抗腫瘤實(shí)驗(yàn)中，家蠅的幼蟲和成蟲產(chǎn)生的抗菌肽效果最好，它們對(duì)4種受試的腫瘤細(xì)胞殺傷力都在86％以上；用生理鹽水代替磷酸緩沖液(PBS)提取抗菌肽可以使抗菌肽對(duì)正常人體細(xì)胞的損傷降到幾乎為零；在抗菌實(shí)驗(yàn)中，家蠅幼蟲經(jīng)不同方法產(chǎn)生的抗菌肽對(duì)同種細(xì)菌的抑制效果就不同，同種細(xì)菌誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗菌肽對(duì)不同細(xì)菌抑制效果也不同；掃描電鏡觀察證實(shí)了抗菌肽對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷力是通過細(xì)胞膜穿孔的途徑；聚丙烯酰氨凝膠電泳顯示了這6

4、組昆蟲抗菌肽各自都由數(shù)種分子量不同的抗菌肽鏈構(gòu)成，其中家蠅幼蟲有7種抗菌肽鏈、家蠅成蟲和淡色庫蚊有5種抗菌肽鏈、家蠅蛹有4種而兩種蟑螂各有3種抗菌肽鏈。 抗腫瘤細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)表明，各種抗菌肽對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用效果不一。有些可以很有效地殺死腫瘤細(xì)胞，如家蠅幼蟲、成蟲產(chǎn)生的抗菌肽；有些昆蟲抗菌肽，如美洲大蠊，不僅不能殺死腫瘤細(xì)胞，而且還有保護(hù)和促進(jìn)其生長(zhǎng)的作用。因此，在利用抗菌肽抑制腫瘤細(xì)胞時(shí)要對(duì)昆蟲抗菌肽進(jìn)行篩選。在抗腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中我們