干酪中五種生物胺的HPLC快速分析技術(shù)研究.pdf

1、干酪在世界各國(guó)素有“乳制品之王”的美稱(chēng)，是一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富的產(chǎn)品。我國(guó)乳品工業(yè)在經(jīng)歷乳粉、液態(tài)乳加工階段后，進(jìn)入干酪階段。在干酪的成熟過(guò)程中，會(huì)形成生物胺。高濃度的生物胺不僅影響食品風(fēng)味，而且對(duì)人體有嚴(yán)重的危害，應(yīng)引起足夠重視。因此建立一種適用于干酪中生物胺的快速分析技術(shù)是十分必要的。 本試驗(yàn)從分析樣品前處理、衍生、檢測(cè)器入手，建立了一個(gè)簡(jiǎn)便、快捷、靈敏、高效的液相色譜分析方法，得到了以下研究結(jié)果： 1。以鄰苯二甲醛(O

2、PA)為衍生試劑，構(gòu)建了一個(gè)生物胺柱前衍生HPLC分析條件。衍生條件：衍生2min，乙酸乙酯萃取6min后HPLC分析。色譜條件：大連依利特HypersilODS2(4.6mmx250mm，5μm)色譜柱；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為335nm；熒光檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng)(Ex)336nm，發(fā)射波長(zhǎng)(Em)466nm；流動(dòng)相為KH2PO4-甲醇(體積比30:70)，流速0.8mL·min-1，進(jìn)樣量10μL，柱溫35℃。 2.分別運(yùn)用HPLC-熒光檢測(cè)

3、器和HPLC-二極管陳列檢測(cè)器，對(duì)五種生物胺進(jìn)行檢測(cè)。熒光檢測(cè)在0.1～10mg·L-1濃度范圍內(nèi)呈線(xiàn)性范圍，組胺、酪胺最低檢出限為0.010mg·L-1，色胺最低檢出限為0.005mg.L-1，腐胺、尸胺最低檢出限為0.015mg.L-1。紫外檢測(cè)在4～40mg·L-1的濃度范圍內(nèi)呈線(xiàn)性范圍，組胺最低檢出限為2mg·L-1，酪胺、尸胺最低檢出限為0.8mg·L-1，色胺、腐胺最低檢出限為1mg·L-1。 3.采用三氯乙酸、無(wú)水

4、乙醇、甲醇為提取溶劑，對(duì)干酪樣品進(jìn)行提取。樣品勻漿提取2次、正己烷凈化處理、衍生后，進(jìn)行HPLC分析，采用外標(biāo)法定量。 (1)三氯乙酸提?。禾砑恿繛?.5mg·L-1時(shí)，熒光測(cè)定回收率達(dá)到80.4％～107.1％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于7.8％。添加量為5.0mg·L-1時(shí)，熒光測(cè)定回收率達(dá)到78.2％～101.3％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于6.1％；紫外測(cè)定回收率達(dá)到80.0％～110.7％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于6.7％。添加量為10mg·L-

5、1時(shí)，熒光測(cè)定回收率達(dá)到79.6％～106.6％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于6.0％；紫外測(cè)定回收率達(dá)到75.7％～103.1％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于7.6％。 (2)無(wú)水乙醇提?。禾砑恿繛?.0mg·L-1時(shí)，熒光測(cè)定回收率在37.8％～118.0％之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在5.1％～21.2％之間；紫外測(cè)定回收率在23.5％～115.2％之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.1％～15.2％之間。添加量為10mg·L-1時(shí)，熒光測(cè)定回收率在39.5％～150

6、.9％之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.9％～19.5％之間；紫外測(cè)定回收率在38.3％～131.1％之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.6％～15.7％。 (3)無(wú)水甲醇提取：添加量為5.0mg·L-1時(shí)，熒光測(cè)定回收率在48.2％～127.7％之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在5.4％～28.0％之間；紫外測(cè)定回收率在63.2％～113.9％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在4.0％～26.4％之間。添加量為10mg·L-1時(shí)，熒光測(cè)定回收率在26.7％～148.4％之間，相對(duì)