hTERT-659G＞A SNP位點(diǎn)的多態(tài)性分析及其與腫瘤易感性的相關(guān)性研究.pdf

1、研究表明端粒酶的激活可能是體細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵步驟,是細(xì)胞癌變的早期事件。絕大多數(shù)腫瘤的發(fā)生是環(huán)境因素與腫瘤遺傳易感因素共同作用的結(jié)果。單核苷酸多態(tài)性是腫瘤遺傳易感性研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域。對(duì)人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(Human Telomerase Reverse Transcriptase, hTERT)基因上的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與腫瘤易感性之間關(guān)系的研究目前國(guó)外有少量文獻(xiàn)報(bào)道,國(guó)內(nèi)尚屬空白。本課題對(duì)hTERT基因上的rs2736098單核苷

2、酸多態(tài)位點(diǎn)與中國(guó)漢族人群腫瘤易感性的關(guān)系進(jìn)行了研究。rs2736098 SNP位點(diǎn)為hTERT基因第2外顯子上的丙氨酸同義突變cSNP位點(diǎn),為鳥嘌呤到腺嘌呤的堿基轉(zhuǎn)換突變。 采集健康查體者靜脈血樣100例、非腫瘤患者靜脈血樣65例、腫瘤患者靜脈血樣123例。其中在非腫瘤患者中男性33例,女性32例,腫瘤患者中男性72例,女性51例。應(yīng)用兩對(duì)內(nèi)側(cè)引物和一對(duì)外側(cè)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并設(shè)計(jì)了針對(duì)該單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)的寡核苷酸探針,建立了

3、單堿基突變的點(diǎn)雜交檢測(cè)方法,并對(duì)上述所有樣本進(jìn)行了基因型分析。應(yīng)用PCR-SSCP結(jié)合DNA序列測(cè)定法對(duì)雜交結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)在全部檢測(cè)人群(288人)中,GG基因型244例,AG基因型35例,AA基因型9例,基因型頻率符合哈迪-溫伯格平衡。其中A等位基因頻率為0.090,G等位基因頻率為0.910,比較發(fā)現(xiàn)本研究人群的SNP位點(diǎn)等位基因頻率與NCBI數(shù)據(jù)庫上收錄的該SNP位點(diǎn)中國(guó)漢族人群中的等位基因頻率有較大差異,與

4、非洲人群中的分布頻率近似。 在對(duì)該SNP位點(diǎn)與腫瘤易感性的分析中,發(fā)現(xiàn)腫瘤患者組中該SNP位點(diǎn)的A等位基因的頻率要高于非腫瘤組中的個(gè)體,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異極顯著(P<0.01)。發(fā)現(xiàn)腫瘤組的男性患者中該SNP位點(diǎn)的等位基因A的頻率要高于非腫瘤組的男性患者,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異極顯著(P<0.01)。與腫瘤組女性相比,腫瘤組男性個(gè)體的腫瘤患病風(fēng)險(xiǎn)要高,OR值為2.07。提示該SNP位點(diǎn)的G→A的轉(zhuǎn)換可以增加攜帶者,特別是男性個(gè)體的腫瘤患病風(fēng)險(xiǎn)。

5、 在實(shí)驗(yàn)過程中,還發(fā)現(xiàn)所有AA基因型樣本在常規(guī)條件下應(yīng)用內(nèi)側(cè)引物1均無PCR產(chǎn)物擴(kuò)增,且不受模板濃度和rTaqDNA聚合酶的影響。在換用內(nèi)側(cè)引物2和外側(cè)引物、或高保真DNA聚合酶、或引物配比、或100℃變性溫度下可擴(kuò)增出相應(yīng)的PCR產(chǎn)物。 本課題研究結(jié)果顯示：1)中國(guó)漢族人群中的rs2736098 SNP位點(diǎn)的等位基因頻率與非洲人群中的分布頻率近似。2)該SNP位點(diǎn)與腫瘤易感性之間存在一定的關(guān)系,可以增加攜帶者,特別是男性個(gè)