益生菌對輪狀病毒性腹瀉小鼠腸道屏障的影響及機(jī)制的探討.pdf

1、目的:通過輪狀病毒(rotavirus,RV)感染新生小鼠,觀察益生菌對RV感染小鼠腸道粘膜的作用,探討益生菌對腸道粘膜屏障的影響及機(jī)制。
　　方法:用MA104細(xì)胞培養(yǎng)輪狀病毒株,并進(jìn)行蝕斑實(shí)驗(yàn)檢測RV毒力。將80只昆明乳鼠隨機(jī)分為對照組(20只)、模型組(30只)、益生菌組(30只)。益生菌組及模型組乳鼠禁食6小時(shí)后給予0.2ml(2×108PFU)的KU株輪狀病毒。病毒吸附24h后,益生菌組給予酪酸梭菌二聯(lián)活菌制劑108CF

2、U/kg(0.1ml/只)灌服,直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束,對照組和模型組分別每天給予0.1ml生理鹽水灌胃。每天觀察乳鼠,記錄乳鼠的腹瀉只數(shù)及體重;分別于灌服益生菌后第1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d處死相應(yīng)組乳鼠3~4只。取小鼠小腸組織,用光鏡和電鏡觀察腸粘膜的病理變化;通過免疫組化方法(SABC法)檢測小腸粘膜中緊密連接蛋白ZO-1(zonula occludens-1)、Occludin的分布和表達(dá);取頸部動脈血液作TNF-α檢測;取

3、小腸液體作sIgA檢測。提取小腸組織核蛋白,用ELISA法檢測核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的含量。采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:1.觀察期間,乳鼠腹瀉率及體重變化顯示,與正常對照組相比,模型組和益生菌組均出現(xiàn)腹瀉,其中模型組在第3d腹瀉乳鼠率達(dá)到高峰,體重明顯下降(P<0.05);同時(shí)間點(diǎn)益生菌組與模型組比較,乳鼠腹瀉率下降,體重增長。
　　2.腸粘膜病理改變的光鏡和電鏡觀察結(jié)果顯示,正常對照組腸粘膜絨毛形態(tài)結(jié)

4、構(gòu)完整,模型組腸粘膜上皮細(xì)胞空泡樣變、絨毛結(jié)構(gòu)紊亂;益生菌組腸粘膜病理改變較模型組明顯減輕。
　　3.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,與正常對照組相比,模型組和益生菌組ZO-1,Occludin表達(dá)明顯降低(P<0.05),第3d其值降到最低;益生菌組與模型組同時(shí)間點(diǎn)相比較,益生菌組的ZO-1、Occludin表達(dá)量顯著增加(P<0.05)。
　　4..腸道內(nèi)sIgA結(jié)果顯示,與正常對照組相比,模型組和益生菌組sIgA有明顯減低(P<

5、0.05),模型組在第3d其值降到最低,以后逐漸恢復(fù)。同時(shí)間點(diǎn)益生菌組與模型組比較,sIgA顯著增加(P<0.05)。
　　5.對照組血清TNF-α、小腸組織NF-κB值一直處于較低水平,模型組與益生菌組血清TNF-α、NF-κB值均顯著升高(P<0.05),給藥后第2天出現(xiàn)明顯升高,第3天達(dá)到高峰,隨后緩慢降低;而同時(shí)間點(diǎn)的益生菌組TNF-α、NF-κB較模型組顯著降低(P<0.05)。
　　結(jié)論:益生菌能夠改善輪狀病毒腹