口腔鱗癌DNL中檢測(cè)造血干細(xì)胞的研究.pdf

1、上海第二醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文口腔鱗癌DNL中檢測(cè)造血干細(xì)胞的研究姓名：葉冬霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：口腔頜面外科指導(dǎo)教師：郭偉2003.5.1上海笫二醫(yī)利大學(xué)碩士畢業(yè)論文中文摘要目的頭頸部惡性腫瘤約占全身惡性腫瘤的5IO％。其中El腔鱗癌在頭頸部惡生腫瘤中占有相當(dāng)大的比例，可發(fā)生于各年齡和口腔各部位。目前，治療口腔鱗癌的主要方法有：手術(shù)、放療和化療?；熡捎谄涮岣甙┌Y患者生存率、減少腫瘤轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)，逐漸被患者接受。但化療也能產(chǎn)生不良反應(yīng)

2、，1984年Hryniuk等首次報(bào)道了化療藥劑量與療效有相關(guān)性的臨床觀察結(jié)果。常規(guī)劑量化療因瘤體內(nèi)藥物分布濃度過低和骨髓內(nèi)、外毒性反應(yīng)，嚴(yán)重限制了化療在口腔腫瘤臨床的應(yīng)用和療效。在晚期或轉(zhuǎn)移性口腔惡性腫瘤的治療中，上述問題更為突出。雖然大劑量化療能增加瘤體內(nèi)的藥物濃度，但會(huì)引起嚴(yán)重的骨髓內(nèi)、外毒性反應(yīng)。因此，迫切需要開辟一條新的治療途徑。隨著科學(xué)的發(fā)展和造血干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)，臨床應(yīng)用超大劑量化療已成為現(xiàn)實(shí)，并逐漸在血液性腫瘤和實(shí)體瘤方面廣泛

3、應(yīng)用。目前有關(guān)造血干細(xì)胞的研究主要集中在骨髓、外周血和臍血，而有關(guān)淋巴結(jié)中是否存在造血干細(xì)胞的研究甚少。因此，本研究擬通過研究口腔鱗癌頸部淋巴結(jié)清掃的石蠟標(biāo)本和DNL(draininglymphnodelymphocyte，引流區(qū)淋巴結(jié)細(xì)胞)，進(jìn)行靜態(tài)、動(dòng)態(tài)和定性分析，從細(xì)胞和分子水平檢測(cè)口腔鱗癌DNL中是否存在造血于細(xì)胞。方法1首先對(duì)口腔鱗癌頸清石蠟標(biāo)本進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，觀察是否有CD34抗原陽(yáng)性細(xì)胞。2新鮮口腔鱗癌頸清標(biāo)本，機(jī)械法處

4、理后梯度離心，得到口腔鱗癌DNL細(xì)胞。將細(xì)胞制成涂片，免疫組化檢測(cè)CD34抗原表達(dá)。3提取DNL細(xì)胞總RNA后RTPCR檢測(cè)CD34mRNA的表達(dá)。Tca8113細(xì)胞系和骨髓細(xì)胞分別作為陰性和陽(yáng)性對(duì)照。4取頸清標(biāo)本和骨髓標(biāo)本，分離得到DNL和單個(gè)核細(xì)胞，在粒細(xì)胞集落刺激因子(G，CSF)刺激下進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，檢測(cè)細(xì)胞集落形成。結(jié)果t9例頸清淋巴結(jié)石蠟標(biāo)本中有14例CD34抗原免疫組化染色呈陰性，其中5例可見弱陽(yáng)性染色。體夕卜DNL細(xì)胞涂片