銀杏葉提取物對細(xì)胞色素P450 2E1表達(dá)的抑制作用.pdf

1、背景與目的 隨著我國生活條件的日益改善，肥胖人群的比例越來越高，因此患非酒精脂肪性肝病(NAYLD)的病人明顯增多?，F(xiàn)認(rèn)為，“二次打擊”學(xué)說可能為酒精性肝病和NAFLD的共同發(fā)病機(jī)制，酒精、肥胖、糖尿病等作為初次打擊，通過引起肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯合成與排泄之間的失衡導(dǎo)致脂肪儲積形成單純性脂肪肝；第二次打擊是指氧應(yīng)激相關(guān)的脂質(zhì)過氧化及炎性細(xì)胞因子的作用，導(dǎo)致脂肪變的肝細(xì)胞發(fā)生炎癥、壞死和纖維化。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)：酒精性脂肪肝病和非酒精脂肪

2、性肝病的發(fā)病機(jī)制非常相似，在這些發(fā)病機(jī)制中有一個共同的聯(lián)系一細(xì)胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1，CYP2E1)的誘導(dǎo)。乙醇、脂肪酸、異煙肼和其它化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)CYP2E1，該酶的活性增高，產(chǎn)生了大量的氧自由基，并導(dǎo)致了肝臟的損害，特別是線粒體的損害，線粒體的損害又加劇了氧應(yīng)激。 銀杏葉提取物(Ginkgo biloba extract，GBE)是一種傳統(tǒng)的中藥，具有抗炎、降血脂、抗過敏等多重藥理作用。

3、國外已有文獻(xiàn)報道，GBE可以抑制CYP2E1的活性，但未能從分子水平進(jìn)行研究。 本實驗研究GBE對乙醇、魚油誘導(dǎo)后的E47細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞色素P450 2E1(CYP2E1)的表達(dá)和脂質(zhì)過氧化的影響。 方法 將E47細(xì)胞(轉(zhuǎn)染了CYP2E1基因地重組載體，能穩(wěn)定表達(dá)CYP2E1基因的人肝癌細(xì)胞)隨機(jī)分為5組對照組、乙醇組、魚油組、GBE+乙醇組、GBE+魚油組。在給予GBE干預(yù)之后，分別用乙醇和魚油誘導(dǎo)E47細(xì)胞，通

4、過細(xì)胞免疫染色和Western blotting觀察CYP2E1的蛋白表達(dá)；以對硝基苯酚(p-nitrophenol，PNP)為探針測定全細(xì)胞CYP2E1的活性變化；測定細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA)和超氧化物岐化酶(SOD)的含量變化，并與對照組比較。統(tǒng)計工具應(yīng)用SPSS 13.0軟件包，統(tǒng)計方法采用單因素方差分析和兩因素相關(guān)分析進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，以P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)果 1.免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示，CYP2E1在對照

5、E47細(xì)胞中的表達(dá)主要為胞漿表達(dá)；在乙醇和魚油誘導(dǎo)組中，CYP2E1的表達(dá)比對照組明顯加深(P<0.05)，且有的細(xì)胞可見核型表達(dá)；GBE+乙醇組和GBE+魚油組中,CYP2E1的表達(dá)強(qiáng)度分別比乙醇組、魚油組低(P<0.05)，與對照組相似。陰性對照未見著色。 2.Western blotting結(jié)果顯示對照組的CYP2E1和GADPH積分光密度之比為1.195±0.287，乙醇組為2.911±0.642：魚油組為2.691±0

6、.448；GBE+乙醇組1.073±0.370；GBE+魚油組1.345±0.168：乙醇組、魚油組均高于對照組，都有顯著性差異(P<0.05)；GBE+乙醇組低于乙醇組，GBE+魚油組低于魚油組，且都有顯著性差異(P<0.05)；GBE+乙醇組、GBE+魚油組與對照組相比無差異(P>0.05)。 3.E47細(xì)胞CYP2E1的活性測定顯示，與對照組相比，乙醇和魚油誘導(dǎo)組全細(xì)胞CYP2E1活性增強(qiáng)(P<0.05)；GBE+乙醇組較

7、乙醇組、GBE+魚油組較魚油組表達(dá)均有降低(P<0.05)，并且均有顯著性差異。 4.GBE能明顯降低細(xì)胞內(nèi)MDA，升高SOD，乙醇組及魚油組與對照組相比，MDA水平顯著升高，SOD水平顯著降低；而GBE+乙醇組和GBE+魚油組的MDA、SOD又恢復(fù)至近似對照組的水平。 5.E47細(xì)胞內(nèi)CYP2E1表達(dá)的灰度值與MDA的含量成正相關(guān)(r=0.850，P<0.01)，而與SOD成負(fù)相關(guān)(r=-0.826，P<0.01)；M