環(huán)氧化酶2在翼狀胬肉新生血管形成中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:翼狀胬肉是我國常見眼表疾病之一,本病尚無有效的藥物治療,手術(shù)切除是目前治療翼狀胬肉的主要方法,但手術(shù)后并發(fā)癥多且手術(shù)后的復(fù)發(fā)率很高,所以治療相當(dāng)棘手,因此進(jìn)一步研究翼狀胬肉的發(fā)病機(jī)制十分必要。本實(shí)驗(yàn)旨在研究翼狀胬肉中COX-2與新生血管的表達(dá)情況,探討 COX-2在翼狀胬肉新生血管生成和發(fā)展中的作用,為探索翼狀胬肉的靶向治療提供新的理論依據(jù)。
　　方法:使用蘇木素-伊紅染色(HE染色)法及免疫組化的方法對實(shí)驗(yàn)標(biāo)本進(jìn)行研究。第

2、一步:臨床收集組織標(biāo)本用于切片制作。門診手術(shù)獲得正常球結(jié)膜組織23例,翼狀胬肉組織45例,術(shù)前裂隙燈檢查排除參與者其他角結(jié)膜性疾病。所有組織經(jīng)過固定劑固定,濃度依次遞升的乙醇脫水,使用石蠟包埋,組織切片,并做好標(biāo)記并保存?zhèn)溆?。第二?HE染色法觀察翼狀胬肉與正常球結(jié)膜組織的形態(tài)學(xué)差異。取切片,經(jīng)脫蠟后蘇木素浸染5 min,將細(xì)胞核染成藍(lán)色,鹽酸酒精分色后伊紅染色10 s,切片脫水、透明后中性樹膠封片,顯微鏡下觀察。第三步:免疫組織化學(xué)方

3、法分別檢測翼狀胬肉和球結(jié)膜組織中COX-2、VEGF、PDGF與CD31分布及表達(dá)情況。取切片,經(jīng)脫蠟后置于PH6.0的抗原修復(fù)液中高熱修復(fù)6 min,3％去離子水封閉內(nèi)源性抗原,在不同組織編號(hào)的玻片上分別加入一抗,4℃孵育過夜,沖洗后加入對應(yīng)二抗,DAB顯色,顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)。
　　結(jié)果:(1)HE染色后正常球結(jié)膜組織與翼狀胬肉組織中形態(tài)學(xué)表現(xiàn):正常球結(jié)膜組織表層上皮細(xì)胞排列整齊,基底上皮細(xì)胞邊界清晰,間質(zhì)血管少;翼狀胬肉翼狀

4、胬肉組織表現(xiàn)為上皮層及基質(zhì)淺層成纖維細(xì)胞增殖,表層上皮細(xì)胞排列紊亂,細(xì)胞體積增大,基底上皮邊界模糊,間質(zhì)中新生血管大量增生。(2)免疫組織化學(xué)方法分別檢測翼狀胬肉和球結(jié)膜組織中COX-2、VEGF、PDGF與CD31分布及表達(dá)情況:23例球結(jié)膜組織中均為呈陰性,翼狀胬肉組織樣本中有36例 COX-2表達(dá)陽性(P<0.01); CD31在兩種組織中均有表達(dá),通過計(jì)數(shù)及統(tǒng)計(jì),翼狀胬肉組織中MVD為20.3±4.4,球結(jié)膜組織中MVD為9.7

5、±2.8(P<0.01); COX-2表達(dá)陽性的翼狀胬肉組織中MVD為19.06±1.84,表達(dá)陰性的翼狀胬肉組織中MVD為10.44±2.98(P<0.01)。翼狀胬肉組織切片中34例PDGF表達(dá)陽性,36例COX-2表達(dá)陽性的胬肉組織中32例PDGF陽性;翼狀胬肉組織切片中39例VEGF表達(dá)陽性,36例COX-2陽性的胬肉組織中34例VEGF表達(dá)陽性;差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.005)。在促進(jìn)翼狀胬肉新生血管生成過程中COX-2的表