胰十二指腸同源盒基因-1在人脂肪間充質(zhì)干細胞分化為胰島分泌細胞中的作用.pdf

1、目的：
　　探討胰十二指腸同源盒基因-1（PDX-1）在人脂肪間充質(zhì)干細胞（hADSC）分化為胰島分泌細胞中的作用。
　　方法：
　　將凍存的人脂肪間充質(zhì)干細胞進行復蘇，并隨機分為實驗組與對照組，實驗組：將攜帶胰十二指腸同源盒基因-1的病毒液（MOI（感染復數(shù)）=50）加入細胞懸液中，混合培養(yǎng)4小時后，去除含有病毒的培養(yǎng)液，更換新鮮的完全培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)至48小時，以保證轉(zhuǎn)染效果；對照組：采用不含病毒液的培養(yǎng)液培養(yǎng)48

2、小時。然后分別采用蛋白質(zhì)印跡法（Western-blotting）和細胞免疫熒光染色方法對感染結(jié)果進行檢測。對感染后15天細胞利用雙硫腙(DTZ)染色觀察胰島素陽性反應細胞，酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測細胞胰島素的分泌量，細胞免疫熒光染色法檢測胰島分泌相關(guān)基因insulin1的表達。
　　結(jié)果：
　　（1）實驗組的人脂肪間充質(zhì)干細胞進行病毒感染48h后，Western blot法和免疫熒光法均可檢測到PDX-1的表達，

3、對照組的細胞則無PDX-1的表達，并且感染的細胞在15d之后仍能檢測到PDX-1的表達。（2）實驗組出現(xiàn)胰島素陽性細胞且被染成棕紅色，對照組未出現(xiàn)胰島素陽性細胞。（3）感染后15d，實驗組和對照組細胞在低糖環(huán)境下分泌的胰島素量分別為(6.98±0.72)、(6.78±0.54) ng/mL，兩組比較，P＞0.05，無統(tǒng)計學意義；高糖環(huán)境下分泌的胰島素量分別為(13.38±0.66)、(6.50±0.64) ng/mL，兩組比較，P＜0.