三種藥用植物內(nèi)生真菌及一種藏藥次級(jí)代謝產(chǎn)物的生物活性研究.pdf

1、本論文對(duì)藏藥唐沖那保（藥學(xué)植物名為山莨菪（Anisodus tangutcus））總生物堿進(jìn)行抗乙酰膽堿酯酶活性跟蹤分離的研究及三種藥用植物中的三株內(nèi)生真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行化學(xué)成分和生物活性研究。運(yùn)用多種現(xiàn)代色譜（硅膠柱色譜法，制備薄層色譜法，凝膠色譜等）分離技術(shù)，并借助1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS波譜方法分離、鑒定了16個(gè)化合物，其中從藏藥唐沖那保總生物堿提取物中跟蹤分離得到3個(gè)托品烷及1個(gè)吡咯烷類生物堿，從半夏(Pi

2、nellia ternate(Thunb.)Breit)內(nèi)生菌BX-9中分離到7個(gè)化合物，從狼毒（Stellera chamaefasme）內(nèi)生真菌LD-3中分離得到4個(gè)化合物，從雷公藤（Tripterygium wil fordii）內(nèi)生真菌LGT-3中分離得到7個(gè)化合物。對(duì)分得的化合物進(jìn)行了抗乙酰膽堿酯酶、單胺氧化酶及抗腫瘤活性研究。研究結(jié)果如下:
　　1.從山莨菪中分離鑒定的生物堿為:scopolamine(1)，aniso

3、dine(2)，cuscohygrine(3)，atropine(4)。采用改良的Ellman法測定了其抗乙酰膽堿酯酶活性，研究表明:在終濃度為100μg/ml時(shí)，它們的抑制率分別為45.28％，38.08％，47.56％，25.10％。
　　2.從半夏內(nèi)生菌BX-9菌絲體和發(fā)酵液中分離純化得到7個(gè)單體化合物，鑒定為:2-Hydroxy-14-tricosenvic acid(5)，4，6，8(14)，22(23)-四烯-3-酮-

4、麥角甾烷[4，6，8(14)22(23)-tetraen-3-one-ergostane](6),Ergosterol(7),Ergosterol peroxide(8),(+)-BrefeldinA(9)，7-oxo-brefeldin A(10)，4-epi-Brefeldin A(11)。采用改良的Ellman法和MTT法對(duì)7個(gè)化合物的生物活性進(jìn)行測定，研究結(jié)果表明:化合物10有一定的抗AChE活性，終濃度為100μg/mL時(shí)抑制

5、率為42.24％，化合物(7-10)對(duì)三株腫瘤細(xì)胞Hela，7721，HL60均有顯著活性，其中化合物8和10在50μg/mL時(shí)，HL-60細(xì)胞無存活，化合物(7-10)的濃度在50μg/mL時(shí)，Hela細(xì)胞的存活率都小于10％，當(dāng)化合物(8-10)濃度在20μg/mL時(shí)，Hela細(xì)胞的存活率仍小于30％。
　　3.從狼毒內(nèi)生菌LD-3菌絲體甲醇提取物中分離得到4個(gè)單體化合物，鑒定為:2-Hydroxy-14-tricosenvi

6、c acid(5)，4，6，8(14)，22(23)-四烯-3-酮-麥角甾烷[4,6,8(14)-22(23)-tetraen-3-one-ergostane](6),Ergosterol(7),Ergosterol peroxide(8)。
　　4.從雷公藤內(nèi)生菌LGT-3的發(fā)酵液中分離純化得到7個(gè)單體化合物，鑒定為:Ergosterol(7),Ergosterol peroxide(8),trihydroxytetralone

7、(12),Aspterric acid(13),4-(2-hydroxy-3-butyn-lenoxy)benzoic acid(14),FructigeninesB(15),brevicompanine B(16)。其中化合物7，8為甾體類，化合物12為四氫萘酮類，化合物13，14為羧酸類，化合物15，16為二酮哌嗪生物堿類化合物。以上化合物生物活性研究表明:化合物12，15，16有一定的抗AChE活性，在終濃度為100μg/mL抑制

8、率分別為45.33，41.95，47.08％;化合物12，14具有中等強(qiáng)度的單胺氧化酶抑制活性，其抑制率分別為60.58，65.81％;化合物15，16在終濃度50μg/mL時(shí)，HL60細(xì)胞的存活率小于10％。
　　5.運(yùn)用分子生物學(xué)手段，對(duì)菌株BX-9、LD-3及LGT-3的rDNA的ITS序列區(qū)核酸進(jìn)行序列分析，并在Blast上與其同源度較高的ITS rDNA序列進(jìn)行比對(duì)，通過聚類分析，以及結(jié)合菌落形態(tài)顏色及菌絲體、分生孢子梗

9、的觀察，鑒定內(nèi)生真菌BX-9和LD-3菌株均為半知菌類叢梗孢目叢梗孢科的青霉屬（Penicillium sp.）真菌，LGT-3為喙枝孢屬（Rhinocladiella sp.）真菌。
　　本論文從一種植物及三株內(nèi)生真菌中分離鑒定了16個(gè)化合物，對(duì)其抗乙酰膽堿酯酶，單胺氧化酶及抗腫瘤生物活性進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)化合物7，8，9，10，15，16具有強(qiáng)抗腫瘤活性，其分別為甾體類，大環(huán)內(nèi)酯類，二酮哌嗪生物堿類化合物。文獻(xiàn)報(bào)道二酮哌嗪生物堿