雙酚A對大鼠新型神經(jīng)生殖內(nèi)分泌調(diào)節(jié)系統(tǒng)影響的研究.pdf

1、背景：環(huán)境雌激素是指具有雌激素特征的一類環(huán)境中的內(nèi)分泌擾亂物質(zhì)。雙酚A(bisphenol A，BPA)是環(huán)境雌激素的一種，為弱雌激素拮抗劑，可結(jié)合于雌激素受體上，最終導(dǎo)致機(jī)體性別分化的改變、青春期提前、發(fā)情周期改變、垂體分泌能力的改變、生殖能力下降等危害。神經(jīng)生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)主要由下丘腦—垂體—性腺軸（HPG）進(jìn)行調(diào)控。近年來大量實(shí)驗(yàn)證明，類固醇激素通過直接作用于新發(fā)現(xiàn)的一組神經(jīng)肽：Kisspeptin及促性腺激素抑制激素（GnIH），

2、對生殖軸分別進(jìn)行正反饋調(diào)控及負(fù)反饋調(diào)控。雌激素對Kisspeptin/GnIH神經(jīng)生殖內(nèi)分泌調(diào)控系統(tǒng)的影響已有報道，而BPA對此系統(tǒng)的影響未見報道。本實(shí)驗(yàn)致力于研究BPA對Kisspeptin/GnIH神經(jīng)生殖內(nèi)分泌調(diào)控系統(tǒng)的干擾作用，探究雙酚A致毒的作用機(jī)理，亦為進(jìn)一步開發(fā)快速測定痕量環(huán)境雌激素的方法奠定基礎(chǔ)。
　　方法：以去卵巢雌性成年大鼠及成年雄性大鼠為實(shí)驗(yàn)動物，腹腔給予不同劑量的BPA或雌二醇后，應(yīng)用相對Real-Time

3、熒光定量PCR法檢測BPA或雌二醇對實(shí)驗(yàn)動物間腦及外圍生殖組織（子宮及睪丸）中Kisspeptin、GnIH及其各自受體基因表達(dá)的影響；用ELISA方法檢測BPA或雌二醇對實(shí)驗(yàn)動物血清中Kisspeptin及GnIH含量的影響。相對Real-Time熒光定量PCR法采用SYBR Green法，其結(jié)果分析方法采用2-ΔΔCt法，用SPSS17.0進(jìn)行單因素方差分析。
　　結(jié)果：1.在去卵巢雌鼠中，BPA及雌二醇處理對ARC核團(tuán)中Ki

4、ss1表達(dá)的抑制作用超過其對AVPV核團(tuán)中Kiss1表達(dá)的促進(jìn)作用，各BPA處理組及雌二醇處理組動物間腦中Kiss1 mRNA的表達(dá)總量均顯著降低（P<0.01）；在雄鼠中，BPA及雌二醇處理對AVPV核團(tuán)中Kiss1表達(dá)的促進(jìn)作用超過對ARC核團(tuán)中Kiss1表達(dá)的抑制作用，各BPA處理組及雌二醇處理組動物間腦中Kiss1 mRNA的表達(dá)總量均升高，其中50μg/kg BPA組、5mg/kg BPA組、10mg/kg BPA組及100m

5、g/kg BPA組中的結(jié)果具有顯著性差異（P<0.05;P<0.01）。BPA及雌二醇處理使去卵巢雌鼠及雄鼠間腦中GnIH mRNA的表達(dá)總量降低（雄鼠50μg/kg BPA組除外），且具有低劑量效應(yīng)；動物體內(nèi)內(nèi)源雌激素水平極低時，低劑量BPA（50μg/kg）使GnIH mRNA的表達(dá)總量顯著上升。BPA使雄鼠間腦中GPR54及GPR147 mRNA表達(dá)量下降，并且與BPA的劑量呈倒“U”型反應(yīng)關(guān)系。2.在雌鼠子宮中，雌二醇處理顯著提

6、高Kiss1 mRNA的表達(dá)量，而對GPR54 mRNA的表達(dá)量無顯著影響；10mg/kg BPA及100mg/kg BPA處理使子宮中Kiss1及GPR54 mRNA的表達(dá)量顯著上升。在雄鼠睪丸中，雌二醇對GnIH及GPR147 mRNA的表達(dá)量顯著降低，而對Kiss1及GPR54 mRNA的表達(dá)量無顯著影響；在BPA處理組中，僅10mg/kg BPA處理使GPR54、GnIH及GPR147 mRNA的表達(dá)量顯著降低。3.在雌鼠血清中

7、，雌二醇處理組及100mg/kg BPA組顯著降低血清中Kisspeptin及GnIH的含量，而10mg/kg BPA組對兩目的神經(jīng)肽的含量無顯著影響。在雄鼠血清中，雌二醇處理顯著降低Kisspeptin及GnIH的含量；在BPA處理組中，各劑量組血清中Kisspeptin及GnIH均呈下降趨勢，其中5mg/kg BPA組及50mg/kg BPA組動物血清中Kisspeptin的含量顯著下降，500μg/kg BPA組、5mg/kg B

8、PA組及50mg/kg BPA組血清中GnIH的含量顯著下降。
　　結(jié)論：本研究進(jìn)一步證明了BPA的雌激素活性；BPA對間腦、外圍生殖器官、血清中Kisspeptin/GnIH神經(jīng)肽的表達(dá)均有不同程度的影響，因此BPA對Kisspeptin/GnIH組成的神經(jīng)生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)具有強(qiáng)烈的干擾作用，并且其干擾劑量范圍大，50μg/kg~100mg/kg均能影響神經(jīng)生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)中的調(diào)控元件；本研究結(jié)果再次指出BPA的作用具有低劑量效應(yīng)及