葛根素對(duì)經(jīng)IL-1β誘導(dǎo)的大鼠后縱韌帶細(xì)胞MMP-9、COL-2的影響.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究葛根素對(duì)經(jīng)炎性因子IL-1β誘導(dǎo)的大鼠頸椎后縱韌帶細(xì)胞胞外基質(zhì)中MMP-9和Col-2的影響。探索其防治后縱韌帶退變的作用機(jī)制，并為臨床使用中藥葛根治療后縱韌帶相關(guān)疾病提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)與理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.體外分離培養(yǎng)大鼠后縱韌帶細(xì)胞，穩(wěn)定傳代。
　　2.MTT法檢測(cè)不同濃度的IL-1β對(duì)大鼠后縱韌帶細(xì)胞的影響，選取適宜的干預(yù)濃度。
　　3.MTT法檢測(cè)不同濃度葛根素對(duì)經(jīng)IL-1β誘導(dǎo)

2、的大鼠后縱韌帶細(xì)胞活性的影響。
　　4.運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)從RNA水平進(jìn)行定性、定量檢測(cè)葛根素干預(yù)經(jīng)IL-1β誘導(dǎo)的后縱韌帶細(xì)胞中MMP-9和Col-2的表達(dá)。
　　5.運(yùn)用Western Blot方法，從蛋白水平檢測(cè)葛根素干預(yù)經(jīng)IL-1β誘導(dǎo)的大鼠后縱韌帶細(xì)胞中MMP-9和Col-2的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.IL-1β各濃度干預(yù)組與對(duì)照組相比較差異有顯著性意義（P＜0.05）。隨I

3、L-1β濃度的增高和干預(yù)時(shí)間的增加，其減低細(xì)胞活性的作用愈加明顯，當(dāng)IL-1β濃度增加到10ng/ml和20ng/ml時(shí)，對(duì)后縱韌帶細(xì)胞的活性影響無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　2.中劑量的葛根素對(duì)后縱韌帶細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用，與Control組比較無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　3.IL-1β干預(yù)組MMP-9、COL-2基因表達(dá)水平最高，與Control組相比具有顯著性差異(P＜0.05)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)葛根素能明顯抑制由I

4、L-1β引起的MMP-9、COL-2基因的表達(dá)，與Control組比較無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　4.IL-1β干預(yù)組MMP-9、COL-2蛋白表達(dá)水平最高，與對(duì)照組相比有顯著性差異(P＜0.05)。400μmol/LPue+10ng/mlIL-1β組與單純IL-1β組相比，由IL-1β干預(yù)引起的MMP-9蛋白表達(dá)增加受到顯著抑制，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.IL-1β可以促進(jìn)后縱韌帶細(xì)胞