氯化鎂對(duì)同型半胱氨酸誘導(dǎo)的大鼠A7r5細(xì)胞增殖及MMP-2、MMP-9表達(dá)的影響.pdf

1、目的：體外觀察不同濃度的同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)單用和聯(lián)用MgCl2對(duì)A7r5細(xì)胞增殖及其基質(zhì)金屬蛋白酶2(matrix metalloproteinase2, MMP-2)和基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase9, MMP-9)表達(dá)的影響，旨在進(jìn)一步探討 Hcy致動(dòng)脈粥樣硬化(artherosclerosis, AS)作用的分子機(jī)制及鎂劑治療的理論基礎(chǔ)，為臨床防治AS提供可靠的實(shí)

2、驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：⑴將不同濃度的Hcy與A7r5細(xì)胞體外共培養(yǎng)48 h,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變；細(xì)胞計(jì)數(shù)及MTT法檢測(cè)不同濃度的Hcy對(duì)A7r5細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)不同濃度的Hcy對(duì)MMP-2、MMP-9 mRNA及其蛋白表達(dá)的影響。⑵0.50mmol/L Hcy分別與不同濃度的MgCl2共同作用A7r5細(xì)胞48 h后

3、，細(xì)胞計(jì)數(shù)、MTT法及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MgCl2對(duì)Hcy誘導(dǎo)的A7r5細(xì)胞增殖的影響；RT-PCR和Western blot法檢測(cè)不同濃度的MgCl2對(duì)Hcy誘導(dǎo)的A7r5細(xì)胞MMP-2、MMP-9 mRNA及其蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：⑴不同濃度的Hcy作用A7r5細(xì)胞48 h：①倒置顯微鏡下可見(jiàn)，對(duì)照組細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，呈紡錘狀，細(xì)胞數(shù)目相對(duì)較少，而實(shí)驗(yàn)組隨著Hcy濃度的升高，細(xì)胞數(shù)目逐漸增多，體積增大，生長(zhǎng)旺盛，呈增殖表現(xiàn)；②細(xì)

4、胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，隨著 Hcy濃度增加，A7r5細(xì)胞數(shù)目增多，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組差異具有顯著性(P<0.05)，表明Hcy能促進(jìn)A7r5細(xì)胞增殖；③MTT法結(jié)果顯示，隨著Hcy濃度增加，吸光度值逐漸增加，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，P<0.05；④細(xì)胞周期結(jié)果顯示，各濃度組 G1期細(xì)胞所占比例均低于對(duì)照組(P<0.05)，而 S期細(xì)胞比例均高于對(duì)照組(P<0.05)，表明Hcy能促使A7r5細(xì)胞從G1期向S期轉(zhuǎn)化，DNA合成增加；⑤RT-PCR結(jié)

5、果顯示，不同濃度Hcy處理組MMP-2、MMP-9 mRNA的表達(dá)逐漸增加，其相對(duì)值與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；⑥Western blot結(jié)果顯示，Hcy使A7r5細(xì)胞MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)增加，各濃度組與對(duì)照組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；⑦RT-PCR及Western blot結(jié)果均顯示正常對(duì)照組中 MMP-2表達(dá)多于 MMP-9，MMP-9表達(dá)較少，分別為(3.60±1.42)％、(1.60±0.

6、82)%。
　　⑵0.50mmol/L Hcy與不同濃度的MgCl2共同作用A7r5細(xì)胞48 h：①細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，A7r5細(xì)胞數(shù)目隨MgCl2濃度的不斷加大而減少，其中2.00、3.00mmol/L MgCl2組與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；② MTT法結(jié)果顯示，隨著MgCl2濃度增加，吸光度值逐漸減少，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，P<0.05；③細(xì)胞周期結(jié)果顯示，MgCl2可抑制Hcy誘導(dǎo)的A7r5細(xì)胞從G1期向S期的

7、轉(zhuǎn)化，使S期細(xì)胞比例減少，DNA合成減少，其中2.00、3.00mmol/L MgCl2組與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；④ RT-PCR結(jié)果顯示，MgCl2對(duì) Hcy誘導(dǎo)的A7r5細(xì)胞MMP-2、MMP-9 mRNA表達(dá)增加的效應(yīng)具有抑制作用，抑制作用隨MgCl2濃度增加而加強(qiáng)，2.00、3.00mmol/L MgCl2組與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；⑤Western blot結(jié)果顯示，MgCl2使Hcy誘導(dǎo)的A