靈芝菌種的分離鑒定及其幾種活性產(chǎn)物的初步研究.pdf

1、靈芝(Ganoderma lucidum)是一種重要的傳統(tǒng)藥用菌，人們對其活性成分，藥理藥效，深層發(fā)酵等方面進(jìn)行了大量的研究工作。由于在實際生產(chǎn)中菌種的作用至關(guān)重要，因此，發(fā)掘和保護(hù)靈芝的種質(zhì)資源是一項十分重要的工作。作者在紫金山考察發(fā)現(xiàn)野生靈芝，采用組織分離法分離出靈芝菌種，開展了基于ITS序列的分子鑒定并構(gòu)建靈芝系統(tǒng)發(fā)育樹；研究了靈芝菌絲體發(fā)酵并測試了幾種胞外酶的活性；對靈芝菌絲體發(fā)酵液多糖的免疫學(xué)試驗表明，菌絲體多糖具有很高的體外

2、免疫活性。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下： 紫金山靈芝的菌種分離與鑒定：通過子實體形態(tài)觀察，擔(dān)孢子掃描電鏡觀察，初步確認(rèn)在紫金山發(fā)現(xiàn)靈芝。通過組織分離法獲得靈芝菌種，提取子實體和菌絲體的DNA并進(jìn)行ITS序列的擴(kuò)增比對，結(jié)果表明，菌絲體與子實體的ITS序列相似度為100％，可以確認(rèn)所分離菌種來自紫金山靈芝子實體。用該菌的ITS序列與GeneBank中相關(guān)ITS序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，發(fā)現(xiàn)紫金山靈芝與GeneBank中靈芝AF506371置

3、信度為99％，進(jìn)一步說明所分離靈芝菌種的可靠性。 靈芝菌絲體發(fā)酵研究：開展了靈芝菌絲體液體發(fā)酵所需碳源及氮源的篩選試驗，結(jié)果表明玉米粉為最佳碳源，黃豆粉為最佳氮源，在此基礎(chǔ)上所進(jìn)行的正交試驗進(jìn)一步確定了菌絲體發(fā)酵的最佳試驗條件，探討了培養(yǎng)基pH，裝液量等因素對發(fā)酵的影響。結(jié)果表明，pH值為5.8，裝液量為50mL，接種量為10％時，菌絲體生物量最大。 靈芝多糖的體外免疫試驗：提取靈芝菌絲體多糖并進(jìn)行了靈芝多糖對小鼠體外免

4、疫細(xì)胞活性影響的研究，結(jié)果表明，靈芝多糖能增強腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的能力，增強腹腔巨噬細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞能力，促進(jìn)胸腺和脾臟淋巴細(xì)胞增殖，說明采用紫金山靈芝菌種發(fā)酵得到的靈芝多糖具有提高小鼠的免疫力的作用。 紫金山靈芝菌絲體的幾種胞外酶活性研究：發(fā)酵過程中幾種胞外多糖水解酶的研究表明，在菌絲體發(fā)酵期間，淀粉酶比其他兩種酶較早地出現(xiàn)酶活高峰，而CMC酶，木聚糖酶的情況則不同，它們的酶活高峰出現(xiàn)的較晚或者酶活性變化較小。對靈芝菌絲體

5、所產(chǎn)漆酶的研究結(jié)果表明，靈芝漆酶活性在酸性范圍表現(xiàn)出較廣適應(yīng)性，其中pH值范圍在4.6-7.0時酶活性較高，pH值為6.4時酶活性最高。 漆酶產(chǎn)酶條件的試驗表明，以麩皮為碳源，靈芝可以產(chǎn)生較多的漆酶，以蛋白胨為氮源產(chǎn)漆酶較多，培養(yǎng)基pH值范圍在3.O-6.0時靈芝菌絲體均可產(chǎn)生較多的漆酶。 通過以上的研究，認(rèn)為從南京紫金山分離得到的靈芝菌種具有開發(fā)利用價值，值的進(jìn)一步研究。本項研究對開發(fā)利用南京本地的靈芝資源提供了參考資