親和毛細(xì)管電泳法在藥物-蛋白相互作用研究中的應(yīng)用.pdf

1、將親和作用應(yīng)用到毛細(xì)管電泳(Capillary Electrophoresis，CE)中，形成了CE的一個(gè)新分支，這就是“親和毛細(xì)管電泳”(Affinity Capillary Electrophoresis，ACE)技術(shù)。自20世紀(jì)90年代初出現(xiàn)以來，該技術(shù)以其強(qiáng)大的分析能力被廣泛地應(yīng)用于蛋白質(zhì)、多肽、核酸片段等生物樣品的分離分析，尤其是表征物質(zhì)間相互作用的各種參數(shù)(如結(jié)合常數(shù))的研究中。通過這種方法測(cè)得的結(jié)合常數(shù)能夠解釋分子之間相互

2、作用的方式和強(qiáng)度，為基于分子識(shí)別的應(yīng)用提供有價(jià)值的信息，這些信息在新藥的發(fā)現(xiàn)和優(yōu)化中有很重要的應(yīng)用價(jià)值。 鑒于ACE法在藥物-蛋白相互作用研究和新藥篩選領(lǐng)域表現(xiàn)出的突出優(yōu)勢(shì)和良好前景，本論文對(duì)其進(jìn)行了較深入的研究。首先以牛血清白蛋白(Bovine SerumAlbumin，BSA)和加替沙星(Gatifloxacin，GT)為模型，考察了ACE淌度移動(dòng)法在研究藥物-蛋白相互作用中的應(yīng)用，測(cè)定了兩者的結(jié)合常數(shù)，該研究在國內(nèi)外相關(guān)文

3、獻(xiàn)中未見報(bào)道。本論文通過優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，考察了用BSA和GT兩種不同物質(zhì)分別作為添加劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的方法，兩種方法測(cè)得的Kb值吻合良好，該值與文獻(xiàn)報(bào)道的用其它方法測(cè)得的結(jié)果也具有很好的一致性，證明了ACE在藥物-蛋白相互作用領(lǐng)域應(yīng)用的可靠性。同時(shí)，為了考察方法間差異對(duì)測(cè)定值的影響，還用傳統(tǒng)的熒光淬滅法測(cè)定了兩者的結(jié)合常數(shù)，初步討論了兩種方法各自的優(yōu)缺點(diǎn)。隨后，選用兩種藥物：安非他酮和格列吡嗪作為模擬混合待篩選樣品，在不同濃度BSA做添加劑的條