銀杏葉提取物（EGb761）抑制肝纖維化的分子機(jī)制及臨床應(yīng)用研究.pdf

1、目的：研究銀杏葉提取物標(biāo)準(zhǔn)品(EGb761)在體外對(duì)肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)增殖，細(xì)胞周期及對(duì)其轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-β<,1>，結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)mRNA表達(dá)的影響；以及其對(duì)慢性乙型肝炎患者肝纖維化及肝竇微循環(huán)障礙的影響，探討其抗肝纖維化的可能的機(jī)制，為其在慢性肝炎肝纖維化中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法：(1)不同濃度(0，1，10，100，500 mg·L)的銀杏葉提取物標(biāo)準(zhǔn)品(EGb761)體外干預(yù)HSC-T6細(xì)胞

2、24 h及48 h后，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)各組細(xì)胞及空白對(duì)照組中TGP-β<,1>，CTGFmRNA的表達(dá)；MTT及流式細(xì)胞儀檢測(cè)其對(duì)HSC-T6細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響。(2)60例慢性乙型肝炎患者隨機(jī)分為EGb761治療組(n=32)及對(duì)照組(n=28)，對(duì)照組給易善復(fù)930mg，治療組易善復(fù)加EGb761 70mg，靜脈注射，每日一次，共4周。治療前后分別檢測(cè)肝功能、Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、Ⅳ型膠原(CⅣ)、透明

3、質(zhì)酸(HA)、層黏蛋白(LA)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β1)、血小板活化因子(PAF)及內(nèi)皮素-1(ET-1)。治療組及對(duì)照組分別有10例治療前后進(jìn)行肝組織活檢術(shù)，肝組織行HE染色，并電鏡觀察治療前后的肝竇微循環(huán)變化。 結(jié)果：(1)銀杏葉提取物標(biāo)準(zhǔn)品(EGb761)能明顯抑制可抑制HSC-T6細(xì)胞的增殖(P<0.05)，阻滯HSC-T6細(xì)胞進(jìn)入S期，停滯于G0/1期并顯著抑制HSC-T6細(xì)胞TGF-β<,1>和CTGF mRNA

4、的表達(dá)(P<0.01或P<0.05)，在一定范圍內(nèi)呈隨劑量增加及時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制效率增加。(2)治療后2組的肝功能水平均較治療前好轉(zhuǎn)，但2組比較無(wú)差異(P>0.05)。治療組治療后PCⅢ、CⅣ、HA、LN、FGFβ<,1>、ET-1及PAF水平明顯下降(P<0.05 or p<0.01)，而對(duì)照組無(wú)明顯變化(p>0.05)。 肝活檢證實(shí)，與治療前(炎癥計(jì)分：15.7±6.3；纖維化計(jì)分：11.9±6.2)和對(duì)照組治療后(炎癥計(jì)分

5、：14.2±6.6；纖維化計(jì)分：11.5±5.6)相比，EGb76l治療組肝組織損傷程度及纖維化程度明顯改善(炎癥計(jì)分：10.7±4.8；纖維化計(jì)分：8.3±4.2)(P<0.05)，與治療前相比，EGb761治療組電鏡下肝竇內(nèi)血細(xì)胞聚集或微血栓形成(32 vs 56，P<0.01)、竇腔及Disse隙膠原沉積(23 vs 38，P<0.05)：竇內(nèi)皮損傷(41 vs 59，P<0.05)、毛細(xì)血管化(17 vs 32，P<0.05)等

6、肝臟微循環(huán)障礙明顯改善；而對(duì)照組治療前后均無(wú)明顯變化(P>0.05)。 結(jié)論：銀杏葉提取物可顯著改善慢性乙型肝炎患者肝纖維化程度其機(jī)制可能為(1)抑制肝星狀細(xì)胞的增殖，降低其增殖指數(shù)(PI)，阻止TGF-β1，CTGFmRNA的表達(dá)從而抑制肝星狀細(xì)胞活性的發(fā)揮，發(fā)揮抗肝纖維化的作用； (2)抑制內(nèi)皮素(ET-1)的病理性增加，拮抗血小板活化因子(PAF)，降低轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β1)水平，保護(hù)肝竇內(nèi)皮細(xì)胞，抑制肝竇內(nèi)血細(xì)胞