銀杏葉提取物EGb761拮抗谷氨酸興奮毒機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察銀杏葉提取物EGb761對(duì)KA誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元興奮毒損傷的保護(hù)作用，研究EGb761對(duì)KA、NMDA誘導(dǎo)的培養(yǎng)海馬神經(jīng)元全細(xì)胞電流的抑制作用，比較不同濃度EGb761對(duì)KA誘導(dǎo)全細(xì)胞電流的抑制差別，進(jìn)一步觀察EGb761對(duì)KAR亞基GluK2的作用，揭示EGb761拮抗谷氨酸興奮毒的作用位點(diǎn)和內(nèi)在機(jī)制，為臨床用藥提供依據(jù)。
　　方法：采用DAPI染色和TUNEL染色法檢測(cè)KA誘導(dǎo)的培養(yǎng)海馬神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡，檢測(cè)EGb76

2、1對(duì)海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用；采用細(xì)胞膜片鉗電生理技術(shù)，以KA、NMDA刺激海馬神經(jīng)元細(xì)胞，記錄EGb761對(duì)KA、NMDA誘導(dǎo)的全細(xì)胞電流的抑制作用；觀察不同濃度EGb761對(duì)KA誘導(dǎo)電流的抑制作用以及電流方向的改變會(huì)否影響EGb761的抑制效果；通過(guò)向HEK293T細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染KAR亞基GluK2；給予PKC抑制劑，研究EGb761拮抗谷氨酸興奮毒作用的分子機(jī)制。
　　結(jié)果：DAPI染色和TUNEL染色的結(jié)果表明，銀杏葉提取物EGb

3、761對(duì)谷氨酸興奮毒的拮抗作用，EGb761可以保護(hù)神經(jīng)元免受KA誘導(dǎo)的興奮毒性損傷。膜片鉗電生理實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，EGb761對(duì)KA誘導(dǎo)的全細(xì)胞電流具有抑制作用，而電流方向的改變不會(huì)影響EGb761的抑制作用，并且這種抑制作用呈現(xiàn)濃度依賴性；EGb761單體成份槲皮素對(duì)KAR也具有抑制作用。EGb761對(duì)NMDA誘導(dǎo)的全細(xì)胞電流也有抑制作用，EGb761濃度為50μg/ml時(shí)抑制效果即達(dá)到最強(qiáng)。不同時(shí)間給藥抑制效果不同，提前20s組抑制效

4、果最為明顯。在轉(zhuǎn)染了GluK2的HEK293T細(xì)胞上，EGb761在濃度為50μg/ml時(shí)，抑制效果最強(qiáng)，提前給藥組較未提前給藥組，抑制效果更強(qiáng)。EGb761同時(shí)可以抑制突觸前興奮性電流(mEPSC)頻率和幅度：在給予PKC抑制劑之后，EGb761對(duì)KA電流的抑制作用減弱。
　　結(jié)論：EGb761能抑制NMDA、KA誘導(dǎo)的全細(xì)胞電流，其對(duì)KA受體的抑制作用機(jī)制可能是直接作用于KA受體亞基，或通過(guò)胞內(nèi)分子機(jī)制間接調(diào)控KA受體離子通道