金蓮花有效成分的提取分離與藥動(dòng)學(xué)研究.pdf

1、中藥金蓮花為毛莨科植物金蓮花(Trollius chinensisBunge)的干燥花，在我國(guó)民間作為藥用植物由來(lái)已久?！侗静菥V目拾遺》中謂其“味苦，性寒，無(wú)毒”，可“治口瘡，喉腫，浮熱牙宣，耳疼，目痛”，具有“明目，解嵐瘴”的功效?，F(xiàn)代藥理研究表明，金蓮花具有抗菌、抗病毒等活性，廣泛用于治療感冒、發(fā)燒、慢性扁桃體炎、急性鼓膜炎、尿路感染和其他炎癥。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，金蓮花主要含有黃酮、有機(jī)酸等成分，水提物具有較強(qiáng)的抗病毒活性，其主要活性成分

2、為黃酮類(lèi)化合物。 中藥藥物動(dòng)力學(xué)是在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，利用動(dòng)力學(xué)原理和數(shù)學(xué)處理方法，定量地描述中藥有效成分、有效部位、中藥單方與復(fù)方制劑通過(guò)各種給藥途徑進(jìn)入體內(nèi)后的吸收、分布、代謝和排泄等一系列過(guò)程的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律及其體內(nèi)時(shí)量一時(shí)效關(guān)系，是中藥現(xiàn)代化研究的重要內(nèi)容之一，可以使傳統(tǒng)天然藥物化學(xué)研究與藥理藥效研究有機(jī)地結(jié)合起來(lái)，對(duì)闡明中藥的有效性、探求中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制等都具有重要意義。 本論文對(duì)金蓮花進(jìn)行了提取分離，

3、制備了葒草素-2''-O-β-L-半乳糖苷、葒草苷和牡荊苷三種單體成分，分別探討了大鼠靜注金蓮花提取物后，主要有效成分葒草素-2''-O-β-L-半乳糖苷、葒草苷和牡荊苷的動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)和大鼠靜注葒草苷單體后在其體內(nèi)動(dòng)力學(xué)、組織分布特征，為闡明金蓮花的作用機(jī)制和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究做出了有意義的探索。第一部分金蓮花化學(xué)成分研究(葒草素-2''-O-β-L-半乳糖苷、葒草苷和牡荊苷對(duì)照品的制備)目的：從金蓮花中分離制備葒草素-2''-O-β-L-

4、半乳糖苷、葒草苷和牡荊苷三種單體成分。 方法：結(jié)合硅膠柱層析、制備HPLC等方法對(duì)金蓮花醇提取物進(jìn)行系統(tǒng)分離純化，通過(guò)薄層、UV、HPLC等方法對(duì)其分離產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。 結(jié)果：提取分離得到三個(gè)化合物，分別鑒定為葒草素-2''-O-β-L-半乳糖昔、葒草苷和牡荊苷。所得葒草素-2''-O-β-L-半乳糖苷、葒草苷和牡荊苷用歸一化法定量，純度均大于98％。 結(jié)論：本法簡(jiǎn)便，制備成本低，葒草素-2''-O-β-L-半乳糖

5、苷、葒草苷和牡荊苷可作為定性定量分析使用的對(duì)照品，同時(shí)可用于藥物代謝動(dòng)力學(xué)的研究。 第二部分金蓮花提取物中三種黃酮苷的藥動(dòng)學(xué)研究目的：建立高效液相色譜法(HPLC)同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中葒草素-2''-O-β-L-半乳糖苷、葒草苷和牡荊苷濃度的方法，并將其用于SD大鼠靜注金蓮花提取物后血漿中三種黃酮苷的藥動(dòng)學(xué)研究。 方法：大鼠以4mL·kg-1靜注給予提取物溶液，分別于給藥后2，5，10，15，20，30，40，50，60，

6、90，120和180min眼眶靜脈取血，置于肝素化塑料離心管中，血漿樣品采用甲醇沉淀蛋白的方法；色譜柱為C18柱，流動(dòng)相為乙腈-0.1％醋酸水，梯度洗脫(0～12min，18～20％乙腈；12.5min，18％乙腈)，流速為1mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)348nm。結(jié)果：葒草素-2”-O-β-L-半乳糖苷、葒草苷和牡荊苷的線性范圍分別為0.315～161，0.326～167和0.215～110μg·mL-1，最低檢測(cè)限分別為0.04，0.

7、03和0.03μg·mL-1。日內(nèi)和日間精密度(RSD)在1.68％和8.43％之間，準(zhǔn)確度在(RE)8.55％之下。其提取回收率在70.35％和86.42％之間。大鼠單次靜注金蓮花提取液4mL·kg-1后，三個(gè)主要藥效成分葒草素-2”-O-β-L-半乳糖苷、葒草苷和牡荊苷的的動(dòng)力學(xué)參數(shù)如下：t1/2α為1.72±0.58，1.88±0.23和1.22±0.42min，t1/2β為10.38±5.75，11.88±0.46和9.99±1

8、.05min，t1/2γ為36.88±3.71，64.50±9.22和45.64±7.66min，V(c)為0.018±0.007，0.016±0.001和0.015±0.006L·kg-1，CL(s)為0.002±0.000，0.002±0.000和0.003±0.000L·(kg·min)-1，AUC(0-t)為3539.4±103.9，2840.8±21 5.6和581.5±59.5mg·min·L-1，MRT(0-t)為31.4

9、6±0.88，15.86±0.59和14.25±0.48min。 結(jié)論：本章建立了同時(shí)測(cè)定血漿中葒草素-2”-O-β-L-半乳糖苷，葒草苷，牡荊苷的高效液相色譜法，并將其應(yīng)用于SD大鼠靜注金蓮花提取物后3種黃酮苷的藥動(dòng)學(xué)研究。該方法具有較高的靈敏度和專(zhuān)屬性，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，方法具有良好的精密度和準(zhǔn)確度，符合生物樣品分析的要求。 目的：1.建立高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定大鼠血漿中葒草苷濃度的方法，并研究不同劑量單次給藥后

10、葒草苷單體在大鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)過(guò)程。2.研究葒草苷在大鼠體內(nèi)的組織分布。方法：1.大鼠以靜注給予葒草苷溶液，分別于給藥后2，4，8，12，16，20，25，30，45，60和90min眼眶靜脈取血，置于肝素化塑料離心管中，樣品預(yù)處理采用甲醇沉淀蛋白后氮?dú)獯蹈?，流?dòng)相復(fù)溶，利用HPLC內(nèi)標(biāo)法(葛根素)，色譜柱為反相C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.1％醋酸水(20:80)，流速為1mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)2

11、50nm用于檢測(cè)內(nèi)標(biāo)物葛根素，348nm用于檢測(cè)葒草苷；2.取大鼠隨機(jī)分為6組，靜注給予20mg·kg-1葒草苷后，于5，15，30，45，60和90min分別放血處死，取心、肝、肺、脾、腎、腦、胃和腸，經(jīng)生理鹽水沖洗，去除少量的淤血或組織內(nèi)容物，并用濾紙吸去水分，稱(chēng)重后于勻漿器中制成500mg·mL-1的生理鹽水勻漿，采用甲醇沉淀蛋白后氮?dú)獯蹈闪鲃?dòng)相復(fù)溶的方法，利用HPLC法(除沒(méi)用內(nèi)標(biāo)外同上方法1)，測(cè)定組織中的葒草苷含量。

12、 結(jié)果：1.葒草苷的線性范圍0.250～50.1μg·mL-1，最低定量限為0.250μg·mL-1，RE為-2.62％，RSD為3.2％(n=6)，0.10。5.00和25.00μg·mL-1三種濃度的日內(nèi)、日間精密度(RSD)分別為3.0％～4.5％和2.9％～6.5％，準(zhǔn)確度(RE)為0.87％～5.6％，回收率68.0％～73.1％，穩(wěn)定性研究結(jié)果表明樣品穩(wěn)定。大鼠單次按三種不同劑量10、20和30mg·kg-1分別靜注葒草苷后

13、，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)分別如下：V(c)為0.364±0.085，0.233±0.014和0.259±0.023L·kg-1，CL(S)為0.057±0.022，0.035±0.020和0.049±0.003L·(kg·min)-1，T1/2y為14.34±2.16，22.53±3.48和25.29±3.27min，AUC0-t為150.601±11.528，422.392± 54.063和593.473±25.516μg·min·m