石蒜組織培養(yǎng)及其生物多樣性的ISSR分析.pdf

1、本研究選擇西南部分地區(qū)及日本的幾個(gè)石蒜品種，從細(xì)胞學(xué)和DNA分子角度，分析了它們的遺傳多樣性水平和遺傳結(jié)構(gòu)狀況，對(duì)紅花石蒜和忽地笑的離體繁殖技術(shù)進(jìn)行了初步研究，得出如下結(jié)論： 1.進(jìn)行了紅花石蒜和黃花石蒜(忽地笑)雙鱗片快速繁殖條件的研究，結(jié)果表明：紅花石蒜(Lycoris radiate)在16小時(shí)800-1200 1x光照下比黑暗條件下出芽率要高：黃花石蒜(Lycoris aurea)在MS+NAA0.2 mg/L+6-BA

2、4mg/L下出芽率為220％，紅花石蒜在MS+。NAA0.2 mg/L+6-BA2 mg/L下出芽率為108％；NAA比IBA有利于石蒜生根；硅藻土顯著提高黃花石蒜雙鱗片出芽率，活性炭起抑制作用；6％蔗糖濃度有利于紅花石蒜小鱗莖增重，MS+6-BA4mg/l+NAA0.5mg/L培養(yǎng)基有利于小鱗莖增殖，切割一刀比兩刀有利于小鱗莖增殖。 2.對(duì)來自西南部分地區(qū)和日本的一些石蒜品種進(jìn)行了核型研究，發(fā)現(xiàn)石蒜存在較大的核型變異。四個(gè)不同

3、居群的三倍體石蒜雖然染色體數(shù)目都是2n=33，但染色體形態(tài)上存在些微的差異，其核型分別為：重慶合川(HC)2n=33=3T+30t；四川大學(xué)苗圃(CD)2n=33=33t；日本巖國(guó)(YG)2n=33=6T+27t：四川峨眉山(EM)2n=33=18st+15t，染色體形態(tài)上存在t，T和st的差別。兩個(gè)不同居群的忽地笑其染色體數(shù)目和核型上也有所不同，四川青城山居群核型為2n=14=6m+4T+4t，云南文山居群核型為2n=16=6m+10

4、T。染色體數(shù)量均為22的石蒜同樣也出現(xiàn)核型上的差別，成都市場(chǎng)購買的兩石蒜核型分別為2n=2m+4sm+4st+6t+6T，2n=4st+18t。四川汶川石蒜核型為2n=18=4m+8st+6t，四川都江堰石蒜核型為2n=24=9m+4st+11t，日本(市場(chǎng)購買)石蒜核型為2n=19=4m+2T+3st+10t，三者的核型結(jié)構(gòu)均為首次報(bào)道。 3.采用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)石蒜居群間和種間共23個(gè)樣進(jìn)行了PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增結(jié)果為

5、：從100個(gè)引物中篩選的5個(gè)引物分別是(CT)8G、(TC)<,8>G、(CT)<,8>RC、(CT)<,8>RG、(CCG)<,6>，除(CCG)<,6>外其共同特征是C和T兩個(gè)堿基的8個(gè)串聯(lián)重復(fù)，說明石蒜屬DNA分子中廣泛存在著CT或TC的串聯(lián)重復(fù)序列。石蒜9個(gè)種間的PCR擴(kuò)增結(jié)果是6個(gè)引物(包括引物58R)共得到414條擴(kuò)增帶，每個(gè)引物可擴(kuò)增出19-25條多態(tài)性帶，平均22條，DNA片斷大小分布在200-2500bp之間，其中具有

6、多態(tài)性的條帶134條，占32％。多樣性分析結(jié)果為：三倍體石蒜居群間的擴(kuò)增沒有出現(xiàn)特異性條帶，表明紅花居群間具高度的遺傳一致性；其余9個(gè)種的擴(kuò)增電泳圖譜經(jīng)POPGENE軟件分析，表明黃花石蒜多樣性最高，白花次之，紅花石蒜多樣性最低；成都市場(chǎng)購買的二倍體紅花石蒜(CSl)與日本市場(chǎng)購買的白花石蒜(RS)距離最遠(yuǎn)，日本廣島的白花石蒜(GD)與四川青城山(QC)距離最近。UPGMA聚類結(jié)果顯示，9種石蒜被分為2大類：出葉期為春天(CSl)和出葉