丹酚酸A通過抑制NF-κB的活化在小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中的抗炎作用.pdf

1、目的 本研究通過脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的炎癥模型，觀察一氧化氮(NO)、炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-6、金屬蛋白酶-9(MMP-9)和NF-kB的含量與表達(dá)，探討丹酚酸A(SAA)對炎性損傷的保護(hù)作用及其可能的分子機(jī)制。 方法 分離純化小鼠腹腔巨噬細(xì)胞后，隨機(jī)分為五組。對照組；LPS刺激組(10μg/ml LPS刺激)；高、中、低濃度藥物組(10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml三種濃度丹

2、酚酸A＋10μg/ml LPS)。分別進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)：用Griess法測定巨噬細(xì)胞上清液中一氧化氮(NO)的含量：放射免疫法測定上清液中白介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量；用明膠酶譜法測定上清液中金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達(dá)；用免疫印跡(Western-blot)法測定細(xì)胞胞漿和胞核中一氧化氮合酶(iNOS)和NF-kB(P65)的表達(dá)。 結(jié)果 1.與對照組相比，LPS刺激巨噬細(xì)胞后，釋放的

3、NO、IL-6和TNF-α含量明顯增高(P<0.01)，高、中、低(10μg/ml，1μg/ml，0.1μg/ml)濃度的sAA與LPS刺激的巨噬細(xì)胞共同孵育后，對巨噬細(xì)胞釋放的NO、IL-6和TNF-α具有明顯的抑制作用(P<0.01)，且呈劑量依賴性。 2.與對照組相比，LPS刺激巨噬細(xì)胞后，細(xì)胞胞漿內(nèi)的iNOS和MMP-9表達(dá)明顯增高(P<0.01)，高、中、低濃度的SAA與LPS刺激的巨噬細(xì)胞共同孵育后，對巨噬細(xì)胞胞漿內(nèi)

4、的iNOS和MMP-9具有明顯的抑制作用(P<0.01)，且呈劑量依賴性。 3.與對照組相比，LPS刺激巨噬細(xì)胞后，細(xì)胞胞核內(nèi)的NF-κB(P65)表達(dá)明顯增高(P<0.01)，高濃度的SAA與LPS刺激的巨噬細(xì)胞共同孵育后，對巨噬細(xì)胞胞核內(nèi)的NF-κB(P65)具有明顯的抑制作用(P<0.01)。結(jié)論1．小鼠腹腔巨噬細(xì)胞經(jīng)LPS刺激后，可引起明顯的炎性損傷，表現(xiàn)為NO、iNOS、炎性細(xì)胞因子IL-6和TNF-α含量與對照組相比

5、顯著增高。 2．用丹酚酸A預(yù)處理后，可有效的減少巨噬細(xì)胞炎性損傷的程度，表現(xiàn)為NO、iNOS、IL-6和TNF-α含量與LPS刺激組相比明顯降低，說明丹酚酸A通過減少這些炎癥因子的釋放來抑制LPS誘導(dǎo)的炎癥損傷。 3．巨噬細(xì)胞經(jīng)LPS刺激后，NF-κB的活性顯著升高，用丹酚酸A預(yù)處理后NF-κB的活性降低，說明丹酚酸A通過抑制NF-κB的活性來發(fā)揮其抗炎的作用，并且通過影響NF-κB的活性而調(diào)控NO、iNOS、IL-6和