腸內(nèi)營養(yǎng)和黃芪對梗阻性黃疸幼鼠腸屏障和肝臟損害的保護(hù)作用.pdf

1、研究背景：小兒梗阻性黃疸(obstructive jaundice,OJ)見于先天性膽道閉鎖、膽管擴(kuò)張癥、膽管發(fā)育不良等疾病，常伴有全身和局部免疫功能異常、營養(yǎng)不良和腸屏障功能障礙，進(jìn)而引起腸道細(xì)菌和內(nèi)毒素移位、腸源性感染和多系統(tǒng)器官損害。在梗阻性黃疸大鼠模型中發(fā)現(xiàn)腸道呈炎癥、水腫改變，腸上皮細(xì)胞之間間隙形成，腸粘膜細(xì)菌附著數(shù)量增加。完全腸外營養(yǎng)(total parenteral nutrition,TPN)時(shí)小腸粘膜上皮細(xì)胞間的緊密連

2、接降低，腸腔內(nèi)分泌型免疫球蛋白A(secretoryimmunoglobulin A,sIgA)含量下降。OJ時(shí)門靜脈受擴(kuò)張的膽總管的壓迫而致腸壁靜脈血回流不暢，腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力降低。 目的：本研究旨在建立幼鼠梗阻性黃疸模型，以模擬嬰幼兒梗阻性黃疸時(shí)的病理生理狀態(tài)。通過腸粘膜上皮細(xì)胞組織學(xué)、超微結(jié)構(gòu)觀察以及血液內(nèi)毒素水平、腹腔液細(xì)菌學(xué)檢測等探討梗阻性黃疸狀態(tài)下幼鼠腸粘膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的損害以及應(yīng)用腸內(nèi)營養(yǎng)對腸粘膜結(jié)構(gòu)完整性的保

3、護(hù)作用。 材料與方法：將40只Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對照組(contro1)，；假手術(shù)組(sham)；梗阻性黃疸組(OJ)和OJ＋能全素組(OJ＋N)。OJ鼠于近肝門處游離并結(jié)扎膽總管，假手術(shù)組僅做游離但不結(jié)扎膽總管。OJ＋N組給予腸內(nèi)營養(yǎng)7d，總熱量為610kJ/Kg.d，氮量1.Og/Kg.d。檢測實(shí)驗(yàn)鼠的體重、血清白蛋白水平；測量腸粘膜絨毛高度和粘膜厚度，應(yīng)用掃描電鏡和透射電鏡觀察腸粘膜上皮的超微結(jié)構(gòu)。計(jì)數(shù)資料采用卡

4、方檢驗(yàn)，計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差( ±s)用四川大學(xué)開發(fā)的統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件PEMS(3.1版本)進(jìn)行組間均數(shù)的方差分析或秩和檢驗(yàn),p＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果：(1)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，除正常對照組和假手術(shù)組實(shí)驗(yàn)鼠體重上升外，OJ組體重顯著降低，OJ+能全素組體重略有下降；(2)OJ組實(shí)驗(yàn)鼠血清白蛋白15.9±2.1g/L、顯著低于正常對照組(20.8±2.6g/L)和假手術(shù)組(20.2±3.0g/L)，均P<0.05，OJ+N組(

5、18.1±2.7g/L)與正常對照和假手術(shù)組比較，差異無顯著性；OJ+N組血清白蛋白水平高于OJ組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；(3)各組實(shí)驗(yàn)鼠血清內(nèi)毒素的測定結(jié)果顯示OJ組血清內(nèi)毒素水平(3.01±0.09 EU/L)顯著高于正常對照組(1.06±0.10 EU/L)、假手術(shù)組(1.28±0.12 ELI/L)和OJ+N組(1.89±0.19 EU/L)，均P<0.05。腹腔液細(xì)菌培養(yǎng)顯示正常對照組細(xì)菌培養(yǎng)陽性1例(1/10)、假手術(shù)組2例(

6、2/10)、OJ組7例(7/7)、0J+N組2例(2/7)，OJ組與對照組、假手術(shù)組，OJ+N組相比，P<0.05；(4)正常對照組和假手術(shù)組實(shí)驗(yàn)鼠回腸粘膜絨毛結(jié)構(gòu)完整，OJ實(shí)驗(yàn)鼠的回腸粘膜絨毛間隙增大，粘膜腺體排列稀疏，杯狀細(xì)胞減少，粘膜萎縮變薄，腸粘膜厚度(260±20μm)和絨毛高度(170±32μm)顯著降低。OJ+N組上述指標(biāo)(426±19μm，242±31μm)與正常對照組(469±23μm，252±25μm)和假手術(shù)組(4

7、57±35μm，250±22μm)比較，差異無顯著性。(5)掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)正常對照組和假手術(shù)組回腸絨毛排列整齊；OJ組回腸絨毛呈現(xiàn)不同程度的脫落、變短、稀疏和排列紊亂，其微絨毛頂端剝脫，形成潰瘍或空洞，甚至基底膜裸露，并可見細(xì)菌附著。OJ+N組回腸絨毛排列整齊，微絨毛密集，杯狀細(xì)胞易見，可見球形分泌顆粒、微絨毛增長；(6)透射電鏡觀察顯示對照組和假手術(shù)組小腸粘膜上皮細(xì)胞線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富，細(xì)胞間緊密連接清晰。小腸粘膜上皮細(xì)胞表面的

8、微絨毛結(jié)構(gòu)清晰。梗阻性黃疸大鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞微絨毛稀疏，細(xì)胞間緊密連接消失以及上皮細(xì)胞連接疏松。線粒體明顯腫脹變性、線粒體嵴不清晰。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，腸上皮細(xì)胞核變性、染色質(zhì)濃集。OJ+N組回腸粘膜上皮有輕微微絨毛脫失，線粒體形態(tài)大多正常，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張，腸上皮細(xì)胞核大部分正常，可見明顯的緊密連接。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)研究首次建立幼鼠梗阻性黃疸模型，檢測了梗阻性黃疸對腸道粘膜結(jié)構(gòu)、血液內(nèi)毒素和細(xì)菌移位的影響。本實(shí)驗(yàn)還采用了腸內(nèi)營養(yǎng)在腸屏

9、障功能保護(hù)方面優(yōu)于腸外營養(yǎng)的特點(diǎn)，研究了梗阻性黃疸制作模型后應(yīng)用能全素制劑對腸道粘膜屏障的保護(hù)作用。研究結(jié)果顯示梗阻性黃疸幼鼠腸粘膜結(jié)構(gòu)的完整性受損，是腸道細(xì)菌和內(nèi)毒素移位到腸道外的器官和組織的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)；證實(shí)腸內(nèi)營養(yǎng)有助于減輕幼鼠梗阻性黃疸時(shí)營養(yǎng)不良的發(fā)生、維持和改善腸粘膜上皮細(xì)胞微絨毛結(jié)構(gòu)和細(xì)胞間緊密連接，從而有效的改善梗阻性黃疸幼鼠腸粘膜上皮屏障功能，減輕腸道細(xì)菌和內(nèi)毒素移位。為臨床上了解梗阻性黃疸對小兒腸黏膜屏障的影響和應(yīng)用腸內(nèi)