HBXIP調(diào)節(jié)癌基因Src表達(dá)參與乳腺癌細(xì)胞遷移.pdf

1、HBXIP(hepatitis B X-interacting protein)，作為本實(shí)驗(yàn)室重點(diǎn)研究的核心蛋白，全稱為乙肝病毒X蛋白相關(guān)蛋白，最初因其可以特異性地與乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus x protein，HBx)的羧基端結(jié)合而得名，含有173個(gè)氨基酸，分子量約為18KD。本實(shí)驗(yàn)室的前期研究發(fā)現(xiàn)HBXIP是一個(gè)重要的癌蛋白在乳腺癌的增殖和遷移過程中發(fā)揮著重要作用，但調(diào)控分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。Src作為S

2、FKs(Src家族激酶)中的一員，是研究最為廣泛的非受體型酪氨酸蛋白激酶，其參與細(xì)胞的多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，在細(xì)胞的增殖、分化等生理過程中發(fā)揮重要功能。Src的表達(dá)或活性異常往往能夠引起前列腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌和乳腺癌等腫瘤。本研究初步探討了HBXIP和Src在乳腺癌細(xì)胞中的作用及其在乳腺癌細(xì)胞和組織中的相關(guān)性，并深入研究了HBXIP對(duì)Src表達(dá)和啟動(dòng)子活性的影響，主要研究結(jié)果如下:
　　本研究采用免疫組化、RT-PCR和Wester

3、n blot等分子生物學(xué)方法，檢測(cè)了HBXIP與Src在臨床乳腺癌組織樣本及其不同乳腺癌細(xì)胞中的相關(guān)性。首先，我們用含87例原位乳腺癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織樣本和11例正常乳腺組織的組織芯片，通過免疫組化實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)了其中HBXIP和Src的表達(dá)水平，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HBXIP與Src的表達(dá)具有顯著正相關(guān)性。實(shí)驗(yàn)室前期的研究結(jié)果顯示，HBXIP在原位乳腺癌組織和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別高達(dá)77.6％(38/49)和94.7％(36/38);

4、本研究利用來源于同一組織包埋蠟塊的切片對(duì)Src的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示，在HBXIP陽(yáng)性的原位乳腺癌組織及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中Src的陽(yáng)性率分別為78.9％(30/38)和89％(32/36)，且在HBXIP陰性組織中Src也呈現(xiàn)陰性;此外，在11例乳腺正常組織中，HBXIP和Src幾乎不表達(dá)。然后，我們應(yīng)用Western blot和RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了不同遷移能力的乳腺癌細(xì)胞系中HBXIP和Src的表達(dá)情況，結(jié)果表明，HBXIP和S

5、rc的表達(dá)水平與乳腺癌細(xì)胞遷移能力呈現(xiàn)明顯正相關(guān)性。因此，我們推測(cè)，HBXIP和Src兩者之間可能存在一定的調(diào)節(jié)作用。于是，我們?cè)谌橄侔┘?xì)胞中過表達(dá)不同劑量的HBXIP，RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)表明HBXIP在mRNA和蛋白水平都能夠以劑量依賴的方式上調(diào)Src的表達(dá)，相反，干擾HBXIP后Src的表達(dá)明顯下調(diào)。本實(shí)驗(yàn)室前期的研究發(fā)現(xiàn)HBXIP可以作為轉(zhuǎn)錄輔激活因子調(diào)控一些關(guān)鍵癌基因的表達(dá)，因此，我們推測(cè)HBXIP可能具

6、有轉(zhuǎn)錄激活Src啟動(dòng)子的活性上調(diào)其表達(dá)。接下來，染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation，ChIP)實(shí)驗(yàn)表明，HBXIP能夠結(jié)合Src啟動(dòng)子。為進(jìn)一步研究HBXIP上調(diào)Src表達(dá)的分子機(jī)制，我們克隆了Src啟動(dòng)子。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在MCF-7細(xì)胞中過表達(dá)HBXIP能顯著增強(qiáng)Src啟動(dòng)子活性。
　　綜上所述，我們發(fā)現(xiàn)HBXIP和Src在臨床乳腺癌組織和乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)存在明顯的正相關(guān)