白花丹素對(duì)術(shù)前PF化療殺傷舌鱗癌細(xì)胞凋亡和自噬的影響及作用機(jī)制.pdf

1、目的：
　　研究白花丹素（Plumbagin,PB）對(duì)術(shù)前PF化療方案殺傷舌鱗癌CAL27細(xì)胞凋亡和自噬的影響及作用機(jī)制。
　　方法：
　　1、人舌鱗癌CAL27細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)。
　　2、MTT法分別檢測(cè)PB、DDP、5-Fu對(duì)CAL27細(xì)胞的增殖抑制作用及半數(shù)抑制濃度 IC50。
　　3、MTT法檢測(cè)PB聯(lián)合PF方案對(duì)CAL27細(xì)胞的增殖抑制作用。
　　4、流式細(xì)胞儀檢測(cè)PB和/或PF方案作用于舌鱗

2、癌CAL27細(xì)胞后的細(xì)胞凋亡率。
　　5、Cyto ID熒光顯微鏡檢測(cè)PB和/或PF方案作用于舌鱗癌CAL27細(xì)胞后的自噬水平。
　　6、Western Blot法檢測(cè)PB和/或PF方案作用于舌鱗癌CAL27細(xì)胞后自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3的表達(dá)。
　　7、Western Blot法檢測(cè) PB和/或 PF方案作用于舌鱗癌 CAL27細(xì)胞后PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　

3、　1、PB、DDP、5-Fu分別以濃度依賴方式抑制CAL27細(xì)胞增殖，其作用24h的半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為7.77μmol/L、10.50μg/ml、1.26mg/ml。
　　2、PB聯(lián)合PF方案作用，與單獨(dú)PF方案比較，舌鱗癌CAL27細(xì)胞的增殖抑制作用明顯增強(qiáng)。
　　3、PB聯(lián)合PF方案作用，與單獨(dú)PF方案比較，舌鱗癌CAL27細(xì)胞的凋亡率明顯增強(qiáng)。
　　4、PB聯(lián)合PF方案作用，與單獨(dú)PF方案比較，舌鱗癌

4、CAL27細(xì)胞的自噬水平明顯增強(qiáng)。
　　5、當(dāng)PB單獨(dú)作用時(shí)，CAL27細(xì)胞中PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表達(dá)不同程度下調(diào)，且PB聯(lián)合PF方案比起單獨(dú)應(yīng)用PF方案，其細(xì)胞中PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表達(dá)亦不同程度降低。
　　6、應(yīng)用PI3K/AKT激動(dòng)劑IGF-1、mTOR激動(dòng)劑MHY1485作用后，該激動(dòng)劑逆轉(zhuǎn)了PB對(duì)CAL27細(xì)胞中PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白的下調(diào)作用，同時(shí)顯著抑制PB對(duì)