氟化物小鼠睪丸間質(zhì)瘤細(xì)胞睪酮合成的影響.pdf

1、氟是地球上廣泛存在的元素,作為機(jī)體生命活動(dòng)必需的微量元素,具有多方面的生理作用。近年來,國內(nèi)外學(xué)者對氟及其化合物的生殖毒性作用進(jìn)行了大量的研究。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)資料和人群流行病學(xué)調(diào)查資料證實(shí)氟不僅可以直接作用于睪丸和附睪,破壞其結(jié)構(gòu),造成生殖損傷,還可以通過干擾下丘腦一垂體一性腺軸和睪丸局部微環(huán)境,引起生殖毒性。生殖系統(tǒng)異常是人類內(nèi)分泌系統(tǒng)異常的主要表現(xiàn),在人類主要表現(xiàn)為:男性精子密度減小,質(zhì)量下降,不育比例上升,睪丸癌患者增加；女性乳腺癌、子

2、宮內(nèi)膜癥增加及不良生殖結(jié)局增加等。這種現(xiàn)象的產(chǎn)生被認(rèn)為是環(huán)境中存在有干擾內(nèi)分泌系統(tǒng)的化學(xué)物,并提出了環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的概念,環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(Environmental Endocrine Disruptors,EEDs)既能影響正常的激素產(chǎn)生、釋放、運(yùn)輸、代謝或清除,還能影響同源受體結(jié)合和/或隨后的細(xì)胞內(nèi)受體作用。目前,氟對雄性生殖系統(tǒng)的損害,主要是氟對睪丸結(jié)構(gòu)的破壞和精子的數(shù)量及質(zhì)量的變化,還有對內(nèi)分泌的影響等,但其作用機(jī)制目前還未

3、見報(bào)道。
　　 目的:
　　 利用MA-10小鼠睪丸間質(zhì)瘤細(xì)胞(MA-10 mouse Leydig tumor cells,mLTC-1)作為模型,觀察NaF對睪丸間質(zhì)瘤細(xì)胞睪酮合成的影響,并探討其作用機(jī)制,為下一步研究提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1 MTT法檢測mLTC-1細(xì)胞的活性,通過進(jìn)行NaF對體外培養(yǎng)mLTC-1細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)確定染毒劑量為8μg/ml、12μg/ml、16μg/ml和

4、20μg/ml,以無血清培養(yǎng)基為對照。
　　 2.mLTC-1細(xì)胞培養(yǎng)基上清中孕酮(Progesterone)的分泌量:采用放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)將對數(shù)生長期的mLTC-1細(xì)胞接種到24孔板中。(1)分別加入濃度為0.0IU/ml、0.1IU/ml、1.0IU/ml、10.0IU/ml、100.0IU/ml的HCG,培養(yǎng)4h后,RIA法測各孔培養(yǎng)基中孕酮的含量；(2)單純的10.0IU/ml HC

5、G刺激和10.0IU/ml HCG和16Hg/ml NaF的混合刺激,分別在1h、2h、3h、6h、12h、24h取培養(yǎng)上清,RIA測定培養(yǎng)上清中孕酮的含量；(3)依次加入含NaF濃度為0、8、12、16和20μg/ml,含HCG濃度為10IU/ml的無血清的培養(yǎng)基,培養(yǎng)2h后,RIA測定上清中孕酮的含量。
　　 3.mLTC-1細(xì)胞中StAR和P450scc mRNA表達(dá)水平:采用實(shí)時(shí)定量PCR法將鋪滿瓶底的80％以上的mLT

6、C-1細(xì)胞分別加入含不同濃度NaF(0、8、12、16和20μg/ml)的無血清的培養(yǎng)基,培養(yǎng)2h后,提取RNA,使用實(shí)時(shí)定量PCR儀測定各個(gè)濃度組NaF對mLTC-1細(xì)胞StAR和P450scc mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.根據(jù)生長曲線可知,體外培養(yǎng)的mLTC-1細(xì)胞在4d,細(xì)胞的活性最強(qiáng),代謝旺盛。
　　 2.mLTC-1細(xì)胞培養(yǎng)基上清中孕酮的分泌量:給予HCG刺激后,mLTC-1細(xì)胞分泌孕酮量

7、隨HCG濃度的增加而增加,在10IU/ml時(shí),其分泌量進(jìn)入平臺(tái)期,故選擇該濃度作為HCG最佳刺激濃度。
　　 3.mLTC-1細(xì)胞中StAR和P450scc mRNA表達(dá)水平:12μg/ml、16μg/ml、20μg/ml NaF濃度組的StAR和P450 mRNA的達(dá)量比對照組這兩個(gè)基因表達(dá)量低,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 在mLTC-1細(xì)胞活性沒有明顯改變的情況下,NaF可以抑N