骨膜細(xì)胞體外分化成骨的基因表達(dá)和功能檢測.pdf

1、【目的】：
　　觀察骨膜細(xì)胞經(jīng)成骨因子BMP7誘導(dǎo)后的細(xì)胞生物學(xué)特征,鑒定骨膜細(xì)胞經(jīng)BMP7體外誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞的基因表達(dá)和細(xì)胞功能。
　　【方法】：
　　取材于成人脛骨骨膜,常規(guī)體外培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組,分別加入BMP7加成骨輔助劑和單純成骨輔助劑進(jìn)行培養(yǎng)。CCK-8法檢測細(xì)胞增殖活性,第5天、第10天、第15天和第20天分別采用RealTime-PCR檢測骨鈣素基因表達(dá),ELISA法檢測上清液ALP、骨鈣

2、素及骨橋蛋白的水平,甲苯胺藍(lán)染色檢測糖胺聚糖及RealTime-PCR檢測Ⅱ型膠原基因,比色法檢測細(xì)胞ALP活性,ALP染色法檢測ALP、VonKossa染色法檢測鈣結(jié)節(jié)。
　　【結(jié)果】：
　　1、兩組骨鈣素基因表達(dá)及上清液ALP、骨鈣素、骨橋蛋白的含量均增高,實(shí)驗(yàn)組與對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　2、兩組細(xì)胞的ALP和鈣結(jié)節(jié)染色陽性率增高,實(shí)驗(yàn)組與對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　3

3、.、甲苯胺藍(lán)染色陽性率及Ⅱ型膠原基因表達(dá)表現(xiàn)為先高后低,實(shí)驗(yàn)組與對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　【結(jié)論】：
　　1、骨膜細(xì)胞在BMP7誘導(dǎo)下體外大量增殖、分化成骨,經(jīng)過基因和細(xì)胞功能檢測證實(shí)其具有明顯的成骨特異基因表達(dá),并具有合成、分泌成骨特異蛋白的功能。
　　2、BMP7體外誘導(dǎo)骨膜細(xì)胞成骨分化過程中,除直接分化成骨外,還存在部分細(xì)胞先經(jīng)軟骨細(xì)胞形成再鈣化成骨的現(xiàn)象。
　　3、經(jīng)骨膜細(xì)胞-BMP7