益氣活血復(fù)方對慢性心衰大鼠心肌MMP-1、TIMP-1影響相關(guān)性及抗心室重構(gòu)機(jī)制的研究.pdf

1、目的：通過建立慢性心衰（CHF）大鼠模型，觀察益氣活血復(fù)方對慢性心衰大鼠心肌基質(zhì)金屬蛋白酶-1（MMP-1）和基質(zhì)金屬蛋白酶特異性抑制物-1（TIMP-1）的影響。從基因、蛋白和組織形態(tài)學(xué)等方面展開研究，以明確益氣活血復(fù)方抑制心室重構(gòu)的機(jī)理，探討益氣活血復(fù)方對慢性心衰的作用機(jī)理和靶點(diǎn)，為中醫(yī)藥防治慢性心衰提供科學(xué)依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 1.以冠脈結(jié)扎法配合力竭式游泳、減食等方法造成大鼠慢性心衰動物模型，后經(jīng)多普

2、勒超聲心動圖檢測左心室射血分?jǐn)?shù)（EF）≤60％，且觀察大鼠狀態(tài)，判定慢性心衰大鼠動物模型造模是否成功。
　　 2.對造模成功的動物模型分為中藥組、西藥組、模型組，并設(shè)立空白對照組?？瞻讓φ战M和模型組大鼠不用藥物，常規(guī)等容積灌胃蒸餾水，各用藥組模型大鼠按人鼠劑量公式換算用藥劑量，中藥組9.2g生藥/Kg/d；賴諾普利西藥組1.5mg生藥/Kg/d。給藥6周后麻醉處死全部大鼠，取其大鼠心臟心肌組織，待檢。
　　 3.利用蛋白

3、印跡方法、實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)和HE染色方法與免疫組化法光鏡下觀察，比較中藥組、西藥組、空白對照組、模型組等各組間慢性心衰大鼠心肌MMP-1、TIMP-1的變化情況及心肌組織形態(tài)學(xué)變化情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.慢性心衰動物模型組MMP-1 mRNA表達(dá)明顯升高，是空白對照組的2.671倍（與空白對照組比較P<0.01）；經(jīng)藥物干預(yù)后各治療組MMP-1 mRNA明顯下降，中藥組效果最為明顯，是空白對照組的1.420

4、倍（與模型組比較P<0.01）；西藥組是空白對照組的1.555倍（與模型組比較P<0.01），中藥組與西藥組相比P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 2.慢性心衰動物模型組MMP-1蛋白表達(dá)明顯升高，為180.232±3.047（與空白對照組比較P<0.01）；經(jīng)藥物干預(yù)后各治療組MMP-1蛋白表達(dá)明顯下降，西藥組效果最為明顯，為83.197±4.919（與模型組比較P<0.01）；中藥組為90.387±6.606（與模型組比較P

5、<0.01），西藥組與中藥組比較P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 3.慢性心衰模型組Timp-1 mRNA表達(dá)明顯降低，是空白對照組的0.743倍（與空白對照組比較P<0.01）；經(jīng)藥物干預(yù)后各治療組Timp-1 mRNA明顯升高，其中藥組效果最為明顯，為空白對照組的1.846倍（與模型組比較P<0.01，與空白對照組比較P<0.01）；西藥組為空白對照組的1.518倍（與模型組比較P<0.01，與空白對照組比較P<0.01）

6、，西藥組與中藥組比較P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 4.慢性心衰模型組Timp-1蛋白表達(dá)明顯降低，為73.543±3.140（與空白對照組比較P<0.01）；經(jīng)藥物干預(yù)后各治療組Timp-1蛋白表達(dá)明顯升高，中藥組效果最為明顯，為153.817±12.178（與模型組比較P<0.01）；西藥組為142.248±10.862（與模型組比較P<0.01），中藥組與西藥組相比P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 5.空白對

7、照組心肌細(xì)胞排列規(guī)整，橫紋清晰，心肌細(xì)胞形態(tài)、大小正常，肌原纖維排列有序。模型組心肌細(xì)胞交織成網(wǎng)，看不到橫紋，肌原纖維排列紊亂，出現(xiàn)空白區(qū)，異染色質(zhì)呈現(xiàn)團(tuán)塊狀，相鄰細(xì)胞閏盤問隙增寬。中藥組心肌細(xì)胞排列較規(guī)整，可見到橫紋，心肌細(xì)胞核較為固縮成圓形，位于心肌細(xì)胞邊緣，肌原纖維排列較有序，仍可見有斷裂及缺損及空白區(qū)。西藥組心肌細(xì)胞排列較規(guī)整，大部分心肌細(xì)胞核位于心肌細(xì)胞邊緣，形態(tài)、大小基本正常，肌原纖維排列較有序。
　　 6.慢性心衰

8、模型組MMP-1利用免疫組化法，經(jīng)軟件分析后模型組其平均灰度值為550.14±132.83（與空白對照組比較P<0.01）；西藥組效果最為明顯為114.72±46.26（與模型組比較P<0.01）；中藥組為124.98±30.40（與模型組比較P<0.01），中藥組與西藥組相比P>0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 7.慢性心衰模型組Timp-1利用免疫組化法，經(jīng)軟件分析后模型組其平均灰度值為115.83±43.25（與空白對照組比

9、較P<0.01）；西藥組為181.16±55.34（與模型組比較P<0.01）；中藥組為172.94±48.75（與模型組比較P<0.01），中藥組與西藥組相比P>0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義；正常組與中藥組、西藥組相比P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義，且治療組優(yōu)于正常組。
　　 結(jié)論：
　　 1.冠狀動脈結(jié)扎法結(jié)合饑餓減食與力竭式游泳，通過超聲心動圖檢測與大鼠行為學(xué)變化，證明本次慢性心衰造模成功。
　　 2.益氣活血復(fù)方通

10、過6周治療后利用實(shí)時熒光定量PCR、Western blot、HE染色法及免疫組化法檢測大鼠心肌組織，發(fā)現(xiàn)益氣活血復(fù)方對慢性心衰大鼠心肌組織中MMP-1相對模型組有抑制其表達(dá)的作用；益氣活血復(fù)方對慢性心衰大鼠心肌組織中Timp-1相對模型組有明顯升高其表達(dá)的作用；益氣活血復(fù)方可抑制或逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)的過程。
　　 3.通過上述數(shù)據(jù)可以證明益氣活血復(fù)方對治療慢性心衰是安全有效的，相對西藥賴諾普利治療效果更加明顯。
　　 4.慢