毒蕈堿受體功能異常誘導(dǎo)哮喘豚鼠氣道高反應(yīng)性的分子機(jī)理.pdf

1、背景:哮喘是一種以嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)浸潤(rùn)為主，多種細(xì)胞(中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等)參與的慢性氣道變應(yīng)性炎癥。氣道高反應(yīng)性(BHR)和慢性炎癥是哮喘的基本特征。在肺部，氣道平滑肌主要由副交感神經(jīng)的迷走神經(jīng)纖維支配，迷走神經(jīng)的作用是通過(guò)神經(jīng)纖維釋放神經(jīng)介質(zhì)乙酰膽堿(ACh)作用于相應(yīng)的受體而形成的。1914年SirHenryDale把ACh受體分為兩類(lèi)：煙堿受體(N)和毒蕈堿受體(M)。M受體有5個(gè)亞型(M1-M5)。5種M受體

2、亞型中，人肺只表達(dá)其中的3種(M1，M2和M3)，它們分布在氣道的不同部分。M1受體位于氣道的副交感神經(jīng)節(jié)，其激動(dòng)劑是McN-A-343，拮抗劑是哌侖西平。M1受體興奮時(shí)可加速神經(jīng)傳遞，增強(qiáng)膽堿能神經(jīng)的功能，同時(shí)在肺泡壁也發(fā)現(xiàn)Mi受體的存在，但其功能還不清楚。M2受體主要位于節(jié)后膽堿能神經(jīng)纖維末梢，其激動(dòng)劑是匹羅卡品，拮抗劑是加拉銨、AF-DX116、methoctramine。M2受體的功能主要是通過(guò)負(fù)反饋的形式調(diào)節(jié)ACh的釋放，所以

3、又稱(chēng)為自身受體。興奮性M3受體主要分布于氣道平滑肌以及粘膜腺體，其選擇性激動(dòng)劑尚未發(fā)現(xiàn)，拮抗劑有4-DAMP、HHD，M3受體興奮可直接引起氣道平滑肌收縮以及腺體分泌。副交感神經(jīng)釋放ACh作用于M3受體引起氣道平滑肌收縮，ACh的釋放受控于M2受體。在哮喘患者和哮喘動(dòng)物模型中M2受體功能異常，從而導(dǎo)致ACh的釋放增加，引起氣道平滑肌收縮，粘液腺過(guò)度分泌，導(dǎo)致BHR。EOS是哮喘發(fā)病的主要炎癥細(xì)胞，EOS胞質(zhì)內(nèi)含有大量顆粒蛋白，這些顆粒蛋

4、白主要有嗜酸性粒細(xì)胞主要堿性蛋白(MBP)、嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(ECP)、嗜酸性粒細(xì)胞過(guò)氧化物酶(EPO)、嗜酸性粒細(xì)胞神經(jīng)毒素(EDN)等，其中MBP被認(rèn)為是誘導(dǎo)M2受體功能異常、導(dǎo)致BHR的關(guān)鍵物質(zhì)。 目的:本課題通過(guò)制備哮喘豚鼠模型，比較正常組、哮喘組以及地塞米松治療組肺泡灌洗液(BALF)中的細(xì)胞總數(shù)與細(xì)胞分類(lèi)、肺組織病理學(xué)蘇木素-伊紅染色(HE染色)、乙酰膽堿酯酶(AchE)以及M2R免疫組化，研究氣管平滑肌內(nèi)M2

5、RmRNA、M3RmRNA以及MBP的mRNA表達(dá)情況，了解豚鼠哮喘模型氣管及肺組織內(nèi)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)、嗜酸性粒細(xì)胞的神經(jīng)趨化以及毒蕈堿受體(MR)、MBP在基因表達(dá)上的變化，應(yīng)用地塞米松治療哮喘豚鼠，觀察地塞米松對(duì)消除炎癥細(xì)胞，尤其是EOS的浸潤(rùn)及其對(duì)MR、MBP表達(dá)的影響，進(jìn)一步研究糖皮質(zhì)激素治療哮喘的靶點(diǎn)。 結(jié)論: 1、哮喘豚鼠肺泡灌洗液內(nèi)EOS增加，肺組織EOS浸潤(rùn)明顯，EOS具有迷走神經(jīng)趨化現(xiàn)象； 2、哮