內(nèi)皮抑素基因治療裸鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型對Ang-2、Tie-2及MVD的影響.pdf

1、本實驗擬利用實驗動物學(xué)、病理學(xué)和免疫學(xué)相關(guān)技術(shù),通過構(gòu)建裸鼠人子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMS)模型,研究子宮內(nèi)膜異位癥血管生成特性,并使用攜帶有人內(nèi)皮抑素基因的腺相關(guān)病毒對裸鼠異位病灶局部注射,觀察內(nèi)皮抑素基因?qū)Ξ愇徊≡钪醒苌伤?2(Agiopoietin-2,Ang-2)、酪氨酸蛋白激酶受體-2(tyrosine kinase receptor-2,Tie-2)及微血管密度(microvesseldensity

2、,MVD)表達的影響,以了解內(nèi)皮抑素基因治療裸鼠EMS模型的可行性及效果。本論文分為以下兩部分:
　　 第一部分裸鼠EMS模型的建立
　　 目的:通過裸鼠的人子宮內(nèi)膜異位移植模型的構(gòu)建,探討建立裸鼠EMS模型的可行性與具體方法。
　　 方法：采用腹膜種植方法,將取下的人在位子宮內(nèi)膜種植入裸鼠腹腔,建立裸鼠EMS模型。于造模后的第1周開腹,肉眼觀察盆腹腔異位病灶的外觀、大小及血管生長情況,并取部分病灶行常規(guī)HE染色

3、組織學(xué)檢查,了解動物模型建立是否成功。
　　 結(jié)果：成功建立裸鼠EMS模型。造模后1周開腹,肉眼觀察異位病灶生長良好,呈隆起透亮的小囊狀,表面血管清晰可見。鏡下觀察可見明顯的子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì),周邊間質(zhì)新生血管豐富。動物造模成功。
　　 第二部分內(nèi)皮抑素對裸鼠EMS模型中Ang-2、Tie-2及MVD的影響
　　 目的:研究內(nèi)皮抑素基因?qū)β闶驟MS模型異位病灶中血管生成系統(tǒng)Ang-2/Tie-2及微血管密度表達的

4、影響,探討內(nèi)皮抑素抗血管生成基因治療EMS的作用。
　　 方法：實驗動物為第一部分已建好的裸鼠模型。于造模1周后開腹,異位病灶局部注射給藥,將其隨機分成內(nèi)皮抑素組(n=20)、空病毒對照組(n=20)和磷酸鹽緩沖液對照組(PBS對照組 n=20)三組。于給藥2周后處死裸鼠,分別觀察各組異位病灶鏡下組織學(xué)變化及腺體數(shù)目,并采用免疫組化SP法,分別檢測各組異位內(nèi)膜組織中Ang-2、Tie-2及微血管密度的表達差異。
　　 結(jié)

5、果：(1)空病毒對照組和PBS對照組腺體增生明顯,間質(zhì)血管豐富；內(nèi)皮抑素組腺體萎縮,間質(zhì)血管減少；內(nèi)皮抑素組腺體萎縮,間質(zhì)血管減少。內(nèi)皮抑素組腺體數(shù)目為6.95±1.54個/LP,顯著少于空病毒對照組(10.20±1.96個/LP)和PBS對照組(10.00±2.03個/LP),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。(2)內(nèi)皮抑素組微血管密度為11.40±2.09個/HP,顯著低于空病毒對照組(16.45±1.88個/HP)和PBS對照組(

6、16.05±1.64個/HP),其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。(3)Ang-2和Tie-2蛋白的陽性反應(yīng)物為棕黃色顆粒,主要定位于子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞的胞漿中,間質(zhì)細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞中也有不同程度的表達,但表達較弱。Ang-2在內(nèi)皮抑素組的陽性率為40％,顯著低于空病毒對照組(75％)和PBS對照組(80％)(P均<0.05),差異有顯著性；Tie-2在內(nèi)皮抑素組的陽性率為45％,顯著低于空病毒對照組(80％)和PBS對照組(85％